Ящур: течение и симптомы болезни. Ящур у крупного рогатого скота. Ящут у свиней, у овец, у коз, у оленей. Диагноз, лечение, меры борьбы и профилактики. Клинические признаки и течение болезни Ящур

Утверждено

Главным управлением

ветеринарии Министерства

сельского хозяйства СССР

ВРЕМЕННОЕ НАСТАВЛЕНИЕ

ПО ПРИМЕНЕНИЮ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЯЩУРА

МОНОВАЛЕНТНОЙ ТИПА A, ТИПА O, ТИПА C, ТИПА АЗИЯ-1

(ИЗ ВИРУСА, ВЫРАЩЕННОГО В КЛЕТКАХ ВНК-21)

1. Общие положения

1.1. Моновалентная вакцина предназначена для профилактической иммунизации крупного рогатого скота, яков, буйволов, овец и коз против ящура, вызванного одним из серотипов A, O, C, Азия-1.

1.2. Моновалентная противоящурная вакцина изготовлена из вируса ящура, выращенного в суспензии клеток ВНК-21/2-17, сорбированного на гидроокиси алюминия, инактивированного формальдегидом с добавлением сапонина.

Для изготовления препарата используют один из следующих штаммов вируса

ящура: A , O , C, Азия-1.

22 1

По внешнему виду это жидкость светло-желтого цвета, с рыхлым, легко разбивающимся при встряхивании белым осадком, образующимся на дне флакона (при хранении).

1.3. Флаконы с вакциной должны быть герметично укупорены и снабжены этикетками, на которых указано наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак, наименование препарата, количество препарата во флаконе, номер серии и госконтроля, дата изготовления (месяц, год), срок годности, условия хранения, обозначение технических условий, доза вакцины.

1.4. Вакцина пригодна для применения в течение 12 мес. после изготовления при соблюдении условий хранения и транспортирования.

Вакцину против ящура моновалентную типа A, типа O , типа C, типа Азия-1

на предприятии-изготовителе, в организациях Союзглавзооветснабпрома и у

потребителя хранят в сухом, темном и закрытом помещении при температуре 4 -

8 °С. Вакцина, подвергавшаяся замораживанию и в результате этого утратившая

коллоидные свойства и способность давать при встряхивании флакона

гомогенную устойчивость взвеси гидроокиси алюминия, к использованию

непригодна и подлежит выбраковке.

1.5. При наличии в вакцине посторонних примесей, хлопьев, плесени, при нарушении целости флакона, отсутствии этикетки, а также при неиспользовании препарата в день открытия флакона вакцина подлежит уничтожению.

2. Методика применения вакцины

2.1. Вакцину вводят строго подкожно крупному рогатому скоту, якам и буйволам в области средней трети шеи, овцам и козам - с внутренней стороны бедра в дозах, указанных на этикетках флаконов.

2.2. При проведении прививок необходимо соблюдать правила асептики и антисептики.

На месте введения вакцины поверхность кожи тщательно дезинфицируют 70-процентным раствором этилового спирта. Шприцы и иглы перед применением стерилизуют кипячением; для каждого животного используют отдельную иглу.

3. Порядок применения вакцин

3.1. Вакцину применяют с профилактической целью и вынужденно в неблагополучном пункте и в угрожаемой по ящуру зоне при уточнении типа вируса.

3.2. В хозяйствах, где вакцину данного серотипа ранее не применяли, иммунизируют всех животных независимо от возраста, а также нарождающийся в течение месяца молодняк.

Ревакцинацию проводят через 2 мес., а затем взрослое поголовье иммунизируют через каждые 6 мес. после первой прививки, молодняк до 18-месячного возраста - через каждые 3 мес. после второй прививки.

3.3. Иммунитет у первично привитых животных наступает к 21-му дню, причем при соблюдении интервалов между ревакцинацией и последующими иммунизациями иммунитет к данному серотипу поддерживается постоянно.

3.4. Молодняк, родившийся от иммунизированных животных, вакцинируют с 4-месячного возраста, а в последующем по п. 3.2 настоящего Временного наставления.

4. Наблюдение за привитыми животными

4.1. За привитыми животными устанавливают наблюдение, имея в виду, что у части таких животных на месте введения вакцины отмечается местная реакция, проявляющаяся в виде небольшой болезненной припухлости, которая через 5 - 10 дней исчезает.

Общая реакция организма может проявляться в виде кратковременного повышения температуры тела на 1 - 2 °С в течение 1 - 3 сут.

4.2. Животным, у которых при ревакцинации наблюдается аллергическая реакция, вводят антигистаминовые препараты (димедрол, адреналин, атропин сернокислый, кофеин и др.).

4.3. В случае осложнений, возникших после введения вакцины, об этом немедленно сообщают Всесоюзному ордена Трудового Красного Знамени государственному научно-контрольному институту ветпрепаратов Минсельхоза СССР (123022, Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, 5) и биопредприятию, изготовившему вакцину.

В соответствии с указанием Главного управления ветеринарии Минсельхоза СССР от 08.09.1982 "О порядке предъявления рекламации на биопрепараты" одновременно во ВГНКИ с нарочным направляют не менее 3 флаконов вакцины, помещенных в термос с температурой 2 - 8 °С, и сопроводительным документом, в котором указывают количество вакцинированных и заболевших животных, характер осложнений, результат типизации вируса, эпизоотическую обстановку по ящуру и другие данные, характеризующие течение заболевания.

Ассоциация содействует в оказании услуги в продаже лесоматериалов: по выгодным ценам на постоянной основе. Лесопродукция отличного качества.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины против ящура типа А. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером № 2045/Киргизия/2007-ДЕПА № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, адъюванты гидроокись алюминия с сапонином и поддерживающую среду в эффективных соотношениях. Вакцина обладает высокой иммуногенностью и способна обеспечить эффективную защиту от возбудителя инфекции ящура, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока. 11 з.п. ф-лы, 14 табл., 1 ил, 4 пр.

Рисунки к патенту РФ 2526570

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении вакцины против ящура типа А инактивированной сорбированной.

Ящур - это острое контагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных. Для него характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. Болезнь сопровождается большими потерями молока, мяса и других видов животноводческой продукции, затрудняет коммерческие операции и хозяйственную деятельность. Для обеспечения устойчивого благополучия страны по ящуру в Российской Федерации реализуется система мероприятий, приоритетными в которой являются предупреждение заноса вируса ящура на территорию, а в районах высокой степени риска - вакцинопрофилактика. В настоящее время в Российской Федерации и странах СНГ для иммунизации крупного и мелкого рогатого скота против ящура применяют, как правило, инактивированные сорбированные, а для иммунизации свиней - инактивированные эмульсионные вакцины .

Технология изготовления противоящурной вакцины из инактивированного вируса начинается с подбора производственных штаммов на основе эпизоотологического анализа динамики ящура в стране и сопредельных государствах. При создании препаратов для специфической профилактики используют соответствующие типы вируса ящура и подбирают штаммы с широким антигенным спектром внутри типа с выраженной перекрестной иммуногенностью. Штамм с широким спектром иммуногенности и удовлетворяющий требованиям региона выбирают с помощью его испытания в реакции перекрестной защиты или чаще в реакции перекрестной нейтрализации. Как правило, в качестве производственного штамма используется популяция вируса, которая в совокупности с системой и условиями промышленного культивирования обеспечивает гарантированное и высокое накопление 146S и 75S компонентов вируса и получение иммуногенной вакцины.

Кроме того, к производственному штамму предъявляются требования стабильности вируса в процессе очистки от тканевых компонентов и концентрирования, а также сохранения вируса при инактивации и длительном его хранении .

Возбудитель ящура обладает значительной антигенной вариабельностью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях и зависит от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других различных факторов. Антигенная изменчивость вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), экспонированных на поверхности капсидных белков . Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого штамма, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма с большой вероятностью вызывают ослабление специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном. Они вызывают также затруднения штаммоспецифической диагностики.

В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики.

Известны штаммы вируса ящура типа А, использовавшиеся в качестве производственных на территории СССР и РФ в течение последних 50 лет.

К ним относятся следующие штаммы: А 7 № 103, выделенный в 1962 году в Куйбышевской области; А 7 № 2, выделенный в 1965 году в Таджикской ССР; А № 717/73, выделенный в 1973 году в Ставропольском крае.

Указанные штаммы использовались для получения диагностикумов и противоящурных вакцин, применявшихся в различных регионах страны.

Однако после ликвидации ящура, вызываемого близкими им в антигенном отношении штаммами вируса, они были сняты с производства и в настоящее время поддерживаются лишь в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» .

Известна вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма A 22 № 550, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъюванта и поддерживающей среды в эффективном соотношении .

Штамм А 22 № 550 вируса ящура выделен в 1964 году в Азербайджане и используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах постсоветского пространства .

Известна инактивированная сорбированная вакцина из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721 вируса ящура Aphtae epizooticae типа A, выделенного в 1999 году в Республике Грузия .

Известна инактивированная сорбированная вакцина из штамма № 1707 «Армения-98» вируса ящура Aphtae epizooticae типа А .

Вакцина против вируса ящура типа A из производственного штамма A № 1707 «Армения-98», применявшегося в буферной зоне Закавказья.

Недостатки вакцин, изготовленных из данных штаммов, состоят в недостаточной антигенной и иммуногенной активности относительно эпизоотических изолятов вируса ящура типа A, циркулирующих в настоящее время в странах Закавказья, Центральной Азии и Ближнего Востока (Турция, Иран и т.д.) ввиду имеющихся существенных антигенных отличий.

Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа A, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъювантов ГОА с сапонином и поддерживающую среду в соотношении, мкг:

Штамм A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП выделен в 1999 году в Республике Грузия и используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах СНГ .

В качестве чувствительной биологической системы используют суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,6.

Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей используют полигексаметиленгуанидин (ПГМГ), а для инактивации вируса - аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). Для нейтрализации АЭЭИ в суспензию добавляют тиосульфат натрия.

Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721 представляет собой суспензию преимущественно из 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура. В качестве адъювантов используют ГОА с сапонином.

Основной недостаток известных вакцин, в том числе и вакцины-прототипа, состоит в антигенных отличиях от изолятов вируса ящура типа A, выделенных в различные временные промежутки, и приготовленные на их основе вакцины обеспечивают эффективную защиту животных только против заражения гомологичным вирусом.

В 2003 году на территории Ирана был выделен новый изолят вируса ящура типа A, значительно отличающийся от ранее изученных штаммов этого типа. В течение 2005÷2006 гг. ящур типа A получил широкое распространение в странах Западной Азии - Иране, Турции, Саудовской Аравии и Пакистане. В феврале 2006 года ящур типа A линии Иран/05 попал во Фракию - европейскую часть Турции, которая граничит с Болгарией и Грецией. Проведение 100% вакцинации всех жвачных с применением штамма A 22 во Фракии в феврале-марте 2006 г. предотвратило распространение ящура в соседние Грецию и Болгарию, однако через 3÷4 месяца появились свежие случаи заболевания .

В связи с этим возникла необходимость получить новую вакцину против вируса ящура серотипа A из штамма А № 2045/Киргизия/2007 для обеспечения безопасности территории России и сопредельных государств от этого возбудителя.

В задачу создания настоящего изобретения входила разработка вакцины противоящурной инактивированной сорбированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала инактивированных сорбированных вакцин против ящура типа A.

Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против ящура типа A инактивированной сорбированной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков.

Предлагаемая вакцина содержит в 1 см 3 препарата: активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученного предпочтительно в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в количестве не менее 3,0 мкг и целевые добавки: ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг, сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг и поддерживающую среду в количестве до 1000000,0 мкг.

Исходный вирус для получения штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП выделен в 2007 году в Республике Киргизия. Штамм получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм адаптирован к первично трипсинизированным клеткам свиной почки и перевиваемым клеточным культурам ВНК-21, IBRS-2 и ПСГК-30.

Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,8.

Для инактивации вируса используют АЭЭИ, который добавляют в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025÷0,05%. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия .

Полученный антиген очищают от балластных примесей с помощью ПГМГ, который вносят в суспензию до концентрации 0,005÷0,007% .

Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура.

Количественное и качественное содержание вирусного сырья определяют методом турбидиметрии .

Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1 см 3 не менее 0,5 мкг 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура.

Необходимую концентрацию 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура в предлагаемой вакцине, составляющую не менее 3 мкг в 1 см 3 готового препарата, получают путем добавления в авирулентный и очищенный антигенный материал расчетного количества адъюванта-сорбента ГОА. Оптимальным является содержание ГОА в 1 см 3 готового препарата в диапазоне от 11000,0 мкг до 15000,0 мкг.

К полученному концентрату добавляют дополнительно 10% водный раствор сапонина из расчета 1500,0 мкг на прививную дозу. Например, для оптимальной прививной дозы 2 см 3 конечная концентрация составляет 0,075%, что соответствует 750,0 мкг его содержания в 1 см 3 готового препарата.

Полученная вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.

Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана.

2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП в эффективном количестве.

3. Целевые добавки.

Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:

1. Вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная.

2. Активное вещество.

3. Целевые добавки.

По сравнению с вакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A в эффективном количестве.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования.

1. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

2. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток животного происхождения и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

3. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

4. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

5. В качестве целевой добавки вакцина содержит адъювант-сорбент ГОА.

6. ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

7. В качестве целевой добавки вакцина содержит адъювант сапонин.

8. Сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

9. В качестве целевой добавки вакцина содержит поддерживающую среду.

10. Поддерживающая среда в количестве до 1000000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

11. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A, ГОА, сапонин и поддерживающую среду в соотношении, мкг:

Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против вируса ящура серотипа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Достижение технического результата от использования изобретения достигается тем, что в состав предлагаемой вакцины введен в качестве активного вещества антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серотипа A, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и обеспечивающего получение противоящурной вакцины сорбированной инактивированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипа A, вызывающего вспышки заболевания в последние годы в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 является новым, ранее неизвестным . Исходный вирус для получения штамма A № 2045/Киргизия/2007 был выделен из проб афтозного материала от больной телки, поступивших в ФГУ «ВНИИЗЖ» в декабре 2007 года из Республики Киргизия (экспертиза № 2045 «Киргизия/07»). Производственный штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.

Полученный штамм депонирован 7 июля 2009 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным номером (ссылкой): производственный штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП вируса ящура типа A.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП вируса ящура типа A характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические свойства

Штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу A и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.

Антигенные свойства

По своим антигенным свойствам штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура относится к серотипу A. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА, РДП и РМН.

При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа A штамма A № 2045/Киргизия/2007 индуцирует образование вирусспецифических и вируснейтрализующих антител, выявляемых в РСК в разведениях 1:80÷1:160 и в ИФА в разведениях 1:10000÷1:12000.

Антигенное родство штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A с производственным штаммом вируса ящура A 22 № 550 и штаммами, ранее выделенными на Азиатском континенте, изучено в РСК, ИФА и РМН.

Результаты исследований в РСК представлены в таблице 1. Антигенное родство (R) штамма A № 2045/Киргизия/2007 с другими вирусами ящура серотипа A составило для A/Иран/97 - 8%, A 22 /Ирак 24/64 - 28%, A/Иран/05 - 68%, A/Турция/06 - 66%, A 22 № 550 - 14%.

Результаты исследований в РМН представлены в таблице 2. Антигенное соответствие (r 1) составило для A/Иран/97 - 0,125, A 22 № 550 - 0,17, A 22 /Ирак 24/64 - 0,6, A/Турция/06 - 0,5. При значении r 1 >0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близко родственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r 1 <0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса .

Результаты исследований в ИФА представлены в таблице 3. Антигенное соответствие (r 1) составило для A 22 № 550 - 0,24, A 22 /Ирак 24/64 - 0,24, A/Иран/97 - 0,19, A/Турция/06 - 0,5. При значении r 1, равном 0,4÷1,0, полевой изолят и производственный штамм находятся в близком антигенном родстве; при значении r 1 0,2÷0,39 полевой изолят антигенно родственен производственному штамму, вакцина из производственного штамма может быть использована, если не будет найдено более родственного штамма, и при условии, что животные будут иммунизированы более 1 раза; при значение r 1 <0,2 полевой изолят отличается от производственного штамма, вакцина из которого не приемлема для защиты от заражения полевым вирусом .

Молекулярно-генетическая характеристика

Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP 1 вируса ящура типа A штамма А № 2045/Киргизия/2007 и выведена первичная структура белка VP 1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A имеет близкое филогенетическое родство со штаммами A/Иран/05 и A/Турция/06 (процент нуклеотидных различий 3,82÷4,3 и 4,46÷5,57 соответственно) и значительно отличается от вакцинного штамма A 22 № 550. Кроме того, он отличается от штаммов вируса этого типа, выделенных в 1998 г. в Армении и Турции, а также в Грузии и Иране в 1999 г. (смотри дендрограмму). Степень нуклеотидных различий последовательностей штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A со штаммами вируса ящура серологического типа A составила: со штаммом A 22 № 550 - 18,15%, со штаммом A № 1707 «Армения-98» - 17,68%, со штаммом A/Турция/98 - 17,2%, со штаммом A (Грузия) 1999/ № 1721 - 18,79%, со штаммом A/Иран/99 - 17,68%.

Таким образом, филогенетический анализ показал, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A принадлежит к новой генетической линии вируса ящура серологического типа A.

Биотехнологические характеристики

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 репродуцируется в монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток ПСГК-30, ВНК-21 и IB-RS-2, и в течение 20÷24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений от 6,33 до 8,25 lg ТЦД 50 -/см 3 (таблица 4). При массированном заражении (1÷10 ТЦД/клетку) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).

Хемо- и генотаксономическая характеристика

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×10 6 Д.

Нуклеиновая кислота представлена одноцепочечной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×10 6 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP 1 , VP 2 , VP 3 и VP 4 . Липопротеидная оболочка отсутствует.

Основным антигенным белком является VP 1 . В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (BP 56a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.

Физические свойства

Масса вириона составляет 8,4×10 -18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см 3 .

Устойчивость к внешним факторам

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при pH 7,2÷7,6. Сдвиги pH как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса.

Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, -облучению, высоким температурам.

Дополнительные признаки и свойства

Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.

Вирулентность - вирулентен для естественно восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации.

Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа A.

Для снижения его эпизоотической опасности необходима своевременная вакцинопрофилактика вновь возникающих очагов болезни, для чего необходимы актуальные высокоиммуногенные вакцины.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем признакам предлагаемого изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности признаков аналога, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вакцины, изложенных в независимом пункте формулы.

Следовательно, заявляемая вакцина соответствует уровню патентоспособности «новизна».

Для проверки соответствия предлагаемой вакцины условию патентоспособности «изобретательский уровень» проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемой вакцины преобразований для достижения технического результата.

Следовательно, предлагаемая вакцина соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень».

Сущность изобретения пояснена в перечнях последовательностей, в которых:

SEQ ID NO:1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP 1 штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A.

SEQ ID NO:2 последовательность аминокислот белка VP 1 штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A.

Сущность изобретения пояснена на дендрограмме, отражающей филогенетические взаимоотношения штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серологического типа A с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура типа A. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP 1 .

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вирус ящура типа A был изолирован из полевого материала, поступившего в ФГУ «ВНИИЗЖ» в виде эпителия афт от КРС, подозреваемого в заболевании ящуром, при проведении лабораторной диагностики этого заболевания и дифференциации его от других везикулярных болезней. При изоляции вируса использован комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов.

Биологические и вирусологические методы включали инокуляцию материала полевого изолята КРС и последующую адаптацию вируса к культурам первично трипсинизированных и перевиваемых линий клеток. Были использованы культуры клеток СП, ПСГК-30, IB-RS-2 и ВНК-21. Первичные и перевиваемые культуры клеток для постановки биопробы выращивали на соответствующих питательных средах в стационарных условиях во флаконах емкостью 50÷100 см 3 , отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1÷10 ТЦД 50 на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% ГЛА и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали хлороформом в отношении 1:10. После 30-минутного инкубирования при 37°C во флаконы вносили по 5÷10 см 3 поддерживающей среды и инкубировали при 37°C до появления ЦПД вируса. При наличии ЦПД (округление клеток, повышение их оптической плотности, дегенерация и отделение клеток от стекла) флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000g в течение 15 минут. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК и ИФА на наличие вирусного антигена, при этом использовали набор коммерческих типоспецифических сывороток и сыворотки, хранившихся в музее штаммов ФГУ «ВНИИЗЖ».

Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 4.

Данные, приведенные в таблице 4, свидетельствуют о хорошей адаптационной активности штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A к использованным клеточным культурам.

Изолированный с помощью перечисленных методов вирус был исследован в РСК с набором диагностикумов на все типы вируса ящура, с целью идентификации типовой принадлежности.

Результаты типирования вируса в РСК представлены в таблице 5.

Приведенные в таблице 5 результаты свидетельствуют о том, что выделенный вирус относится к типу A.

Вакцину против ящура типа A инактивированную сорбированую готовят из вируса штамма A № 2045/Киргизия/2007, выращенного в суспензионной культуре клеток ВНК-21. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,8. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,001÷0,05 ТЦД 50 на клетку.

Культивирование вируса ведут при температуре 36÷37°C. Через 11÷13 часов инкубирования проводят подсчет живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15÷20%, то инкубирование продолжают еще 2÷3 часа. При достижении количества мертвых клеток 90÷95% культивирование прекращают и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S и 75S компонентов. Количество 146S+75S компонентов в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см 3 .

В таблицах 6, 7, 8 и 9 приведены результаты культивирования штаммов A № 2045/Киргизия/2007, A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП, A № 1707 «Армения-98-ДЕП» и A 22 № 550 вируса ящура типа A, из которых следует, что культуральные свойства перечисленных штаммов существенно отличаются по двум изученным параметрам:

1) штамм A № 2045/Киргизия/2007 имеет более короткий период репродукции (12,5 часа) по сравнению со штаммом A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП и A № 1707 «Армения-98-ДЕП» (15÷16 часов);

2) штаммы A № 2045/Киргизия/2007 и A 22 № 550 дают более высокий процент выхода иммуногенных компонентов (90,1% и 89,9% соответственно) по сравнению со штаммами A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП и A № 1707 «Армения-98-ДЕП» (61,5% и 58,1% соответственно).

Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15÷20% раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до pH 8,0÷8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025÷0,05%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12÷24 часов при 36÷37°C и pH 7,2÷7,6 с перемешиванием через 5÷6 часов в течение 3÷5 минут. Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия.

В теплую суспензию добавляют 10% раствор ПГМГ до концентрации 0,005÷0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.

В таблице 10 приведены результаты исследований по изучению влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S и 75S) компоненты вируса ящура штаммов A № 2045/Киргизия/2007 и A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП.

Приведенные в таблице 10 данные свидетельствуют о том, что иммуногенные компоненты вируса ящура штамма A № 2045/Киргизия/2007 не уступают в устойчивости к инактивации и очистке в условиях производства вирусу ящура штамма A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП. Особенно важным является тот факт, что в процессе инактивации и очистки вируса из штамма A № 2045/Киргизия/2007 не произошло существенных изменений в количестве 146S и 75S компонентов, полученных при репродукции вируса.

Полученный антиген контролируют на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса и стерильность. Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в прививной дозе адсорбированной вакцины получают путем концентрирования антигена ГОА.

Расчетный объем ГОА 3% концентрации добавляют в охлажденную суспензию антигена при работающей мешалке. Перемешивание ведут в течение 30 минут. После седиментации ГОА сливают расчетный объем оставшейся суспензии. Конечная концентрация ГОА должна быть в пределах 1,62±0,488 Р<0,01 мг/см 3 n=10, а концентрация 146S и 75S компонентов вируса ящура, по меньшей мере, 3,0 мкг/см 3 готового препарата. Затем в суспензию добавляют дополнительно 10% раствор сапонина до конечной концентрации 0,05÷0,15%, что соответствует 500,0÷1500,0 мкг сапонина в 1 см 3 готовой вакцины.

Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы и проводят контроль ее стерильности в соответствии с ГОСТ 28085.

Авирулентность и безвредность вакцины проверяют на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2,0 см 3 , а затем подкожно в дозе 10,0 см 3 . Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут в течение 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или на морских свинках.

Полученная вакцина представляют собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым белым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.

Оптимальный компонентный состав полученной адсорбат-вакцины против ящура типа A приведен в таблице 11.

Авирулентность и безвредность вакцины проверили на 5 головах КРС. Препарат вводили каждому животному под слизистую языка в дозе 2,0 см 3 , а затем подкожно в дозе 10,0 см 3 . Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 суток.

По окончании контроля на авирулентность и безвредность вакцину проверили на иммуногенную активность. Испытание провели на 4 головах телят массой 70÷80 кг. Адсорбат-вакцину вводили подкожно в дозе 2,0 см 3 . Контрольное заражение телят проводили гомологичным штаммом вируса ящура на 28 день после вакцинации (ДПВ). Результаты исследований представлены в таблице 12.

Приведенные в таблице 12 данные показали, что заболел 1 теленок из 4 голов, 3 были защищены от генерализации процесса на 28 день после вакцинации. Уровень гуморального иммунитета у привитых животных составил 4,81±0,53 log 2 .

Проведены испытания адсорбат-вакцины против ящура типа A, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мкг:

Авирулентность и безвредность полученной вакцины проверили на 5 головах КРС. Препарат вводили каждому животному под слизистую языка в дозе 2,0 см 3 , а затем подкожно в дозе 10,0 см 3 . Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 суток после заражения.

По окончании контроля на авирулентность и безвредность вакцину проверили на иммуногенную активность. Испытание провели на 5 головах КРС массой 250÷300 кг и 5 головах телят массой 70÷80 кг. Адсорбат-вакцину вводили подкожно в дозе 2,0 см 3 . Контрольное заражение проводили гомологичным штаммом вируса ящура на 28 день после вакцинации (ДПВ) для телят и на 90 день для быков. Результаты исследований представлены в таблицах 13÷14.

Приведенные в таблицах 13÷14 данные показали, что заболел 1 бык из 5 голов, а 4 были защищены от генерализации процесса на 90 день после вакцинации а, все 5 голов телят были защищены от генерализации процесса на 28 день после вакцинации. Уровень гуморального иммунитета у привитых животных на момент заражения составил 5,00±0,27 log 2 для быков и 6,20±0,63 log 2 для телят, что свидетельствует об эффективности испытанной вакцины.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемой вакцины следующей совокупности условий:

вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;

Для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью приведенных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;

вакцина против ящура типа A сорбированная инактивированная, изготовленная из штамма A № 2045/Киргизия/2007 в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Источники информации

1. Bojko A. A. Declaration sur I apparition en URSS d un type virus aphteux different des souches de type A anterieurement etudiees dans le Pays. BOIE, 1965, 64, V. 2. - P. 1075-1077.

2. Pepep X. Ящур: пер. с нем./ Г.А.Сурковой; под ред. и с предисл. П.В. Малярца. - М.: Колос, 1971. - 432 с.

3. Ящур: монография / А.Н. Бурдов, А.И. Дудников, П.В. Малярец [и др.]. - М.: Агропромиздат, 1990. - 320 с.

4. Вирусные болезни животных / В.Р. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев [и др.]. - М.: ВНИИТИБП, 1998. - С.532-548.

5. Временная инструкция по изготовлению и контролю противоящурной концентрированной гидроокись алюминиевой формолвакцины из лапинизированного вируса A 22 . Утверждена ГУВ СССР 25.03.1971 г.

6. Промышленный регламент на производство вакцины против ящура типов A, O, C, Азия-1, Сат-1, Сат-2 и Сат-3 инактивированной сорбированной моно- и поливалентной (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21): утв. Директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 11.09.2009. - Владимир, 2009. - 216 с.

7. Промышленный регламент на производство вакцины против ящура инактивированной эмульсионной моно- и поливалентной для профилактики ящура свиней (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21): утв. Директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 11.09.2009. - Владимир, 2009. - 240 с.

8. Пат. РФ 2294760, МПК A61K 39/135, Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа A/ В.В. Михалишин, Т.Н. Лезова, А.В. Щербаков, Д.В. Михалишин, Н.С. Мамков; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 21.12.2004; опубл. 10.06.2006 г. (прототип).

9. Пат. РФ 2140452, МПК A61K 39/135, Штамм N 1707 "АРМЕНИЯ-98" вируса ящура типа A для изготовления диагностических и вакцинных препаратов/ В.М. Захаров, В.К. Спирин, А.И. Гриценко [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 15.03.1999; опубл. 27.10.1999 г.

10. Пат. РФ 2242513, МПК A61K 39/135, Штамм A (ГРУЗИЯ) 1999/ № 1721 вируса ящура типа A для изготовления диагностических и вакцинных препаратов; ФГУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 24.11.2003; опубл. 20.12.2004 г.

11. Foot-and-mouth Disease. Sitiation worldwide and major epidemiological events in 2005-2006/ K. Sumption, J. Lubroth, T. Murrai, S. De la Rocque// Empress/Focus on. - 2007. - № 1.

12. Пат. РФ 594771, МПК A61K 39/12, Средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов/ Н.А. Улупов, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий, Д.С.Жук; ВНИЯИ - Заявл. 07.05.1973; опубл. 07.07.93 г.

13. Пат. РФ 2054039, МПК A61K 39/135, Способ очистки и стерилизации культурального вируса ящура/ Т.Н. Лезова, Н.А. Улупов, В.В. Борисов, В.В. Михалишин, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий; ВНИЯИ - Заявл. 07.02.1992; опубл. 10.02.1996 г.

14. Авт.свид. СССР 784335, C12Q 1/02, Способ определения качества вирусного сырья/ А.Ф. Бондаренко; ВНИЯИ - Заявл. 04.07.1979; опубл. 20.03.2000 г.

15. Пат. 2451745 Российская Федерация, МПК A61K 39/135, Штамм A 2045/Киргизия/2007 вируса ящура Aphtae epizooticae типа A для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа A/ Е.В. Белик, В.В. Борисов, А.В. Щербаков, С.Р. Кременчугская [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 26.07.2010; опубл. 27.05.2012 г.

16. OIE. Manual of diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial animals (Mammals, Birds and Beers). - 6 th ed. - Paris, 2008. - Vol.1.- P 203÷207.

17. Selection of foot and mouth disease vaccine strains - a review/ D.J. Paton, J.F. Valacher, J. Bregman // Rev. Sci. Techn. OIE. -2005. - Vol.24, № 3. - P. 981÷993.

ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная, содержащая активное вещество и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером производственный штамм вируса ящура серотипа A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, в эффективном количестве.

2. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

3. Вакцина по п.2, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток животного происхождения и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

4. Вакцина по п.3, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

5. Вакцина по п.4, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

6. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит адъювант-сорбент гидроокись алюминия (ГОА).

7. Вакцина по п.6, отличающаяся тем, что она содержит ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

8. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит адъювант сапонин.

9. Вакцина по п.8, отличающаяся тем, что она содержит адъювант сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

10. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит поддерживающую среду.

11. Вакцина по п.10, отличающаяся тем, что она содержит поддерживающую среду в количестве до 1000000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

12. Вакцина по любому из пп.1-11, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A, ГОА, сапонин и поддерживающую среду в соотношении, мкг.

Ящур (Aphtae epizooticae) - острая, чрезвычайно контагиозная вирусная болезнь свойских и диких парнокопытных животных, которое характеризуется кратковременной лихорадкой, развитием афтозноерозийных сутокажений на слизистой оболочке ротовой пустоты, бесшерстных участках кожи венчика, межкопытной щели и вымени. На ящур может болеть человек.

Историческая справка. Первое сообщение о заболевании животных на ящур было сделано в 1546 г. в Итали Д. Фракастро. В 1764 г. норвежский исследователь Сагар на основе своих наблюдений указал на контагиозность этой болезни. Вирусная етіологія ящуру была установлена Леффлером и Фрошем (1897), более поздний Хеккером (1899). Множественность типов (плюралітет) возбудителя обнаружили Валле и Карре (1922), которые объясняло этим фактом причину повторного заболевания животных на ящур. В XVI - XIX ст. в многих странах мира ящур неоднократно проявлялся в виде значительных эпизоотий с охватом миллионов животных.

Ныне ящур каждый год регистрируется в многих странах Европы, Ази, Африки и Южной Америки. В Росси ящур установлен в 1881 г. и продолжительное время было стационарной болезнью. В Украине благодаря употреблению широкопланових протиящурних мероприятий и внедрению в практику научных разработок отечественных ученых В. П. Онуфриева, М. В. Рев, А. И. Собко, С. Р. Дидовця, Г. Ф. Бондаренко ящур полностью ликвидирован, однако реальная угроза занесения его из соседних стран еще существует. Ящур наносит значительных экономических убытков, которые состоят из высокой летальности молодняка, которая может достигать 20-50 %, снижение молочной производительности переболевших коров, огромных затрат на проведение суровых карантинных и ветеринарно-санитарных мероприятий.

Возбудитель болезни Ящур - мелкий вирус (диаметром 10-30 нм) из семьи Picornaviridae, что имеет сферическую форму. Состоит из икосаедрального капсиду, одноцепной РНК т 4 структурных белков. Существует 7 типов вируса ящуру - А, О, С, SAT-1, SAT-2, SAT-3 и Азия-1, любой из которых имеет по несколько серологічних вариантов и различается за антигенными и иммунологическими свойствами. После перехворювання животные приобретают иммунитет только к гомологічного вирусу, который не выключает возможности повторного инфицирования новым типом возбудителя яшуру.

В лабораторных условиях вирус яшуру поддерживают на морских свинках и белых мишах-сисунах и в первичных культурах клеток почек телят или сутокосят или перещеплюваній линии ВНК-21 и СПЕВ.

Вирус ящуру чрезвычайно стойкий к влиянию физических факторов и химических веществ. Не разрушается 75 %-г раствором спирта (в отличие от ентеровирусов), эфиром, хлороформом, чотирихлористим углеродом, толуолом, лизолом, фенолом в концентрациях, которые инакти-вируют другие вирусы. Хлорная известь, крезол, сулема разрушают вирус ящуру лишь через несколько часов. В стенках афт вирус может сохраняться на пастбищах к следующему сезону, летом вирус активный в стоящих водоемах 6-12 суток, в сене - С суток, осенью и зимой - 185 -200 суток. В сточных водах остается жизнеспособным на холоде в течение 130 суток, улитку и осенью - 20-49 суток, в гноивцке - до 40 суток, в мерзлом гное - в течение 5 мес. На шерстном покрове скота сохраняется до 50 суток, одежде людей - до 100 суток, в помещениях - до 70 суток. Зимой на стеблях растений остается вирулентным 95 - 100 суток, на поверхности земли - 146-163 суток. В засоленных и копченых продуктах вирус сохраняется до 50 суток, в замороженных продуктах - до 28 суток, мясе - до 8 мес, в лимфоузлах, жире, внутренних органах и костном мозге - до 194 суток, в масле при 5 °С - до 45 суток, в свежем молоке при 37 °С - 12 ч, охлажденному и сохраненному при +4 °С - 15 суток, сухом молоке - до 2 лет, в засоленных шкурах при 15 °С - до 42 суток. Вирус разрушается при 37 °С через 12 ч, при 70 °С - 30 мин, в молоке при 65 °С - через С мин, при 70 °С - 15 мин, при 80 - 100 °С - за несколько секунд. При биотермичном обеззараживании гноя вирус гибнет на глубине С - 40 см через 6 суток, в более поверхностных пластах - через 10-15 суток. Вирус мгновенно разрушается в кислой среде (рн = 6 и низшее), инактивирується в течение 3 суток молочной кислотой во время созревания мяса и снижение рн до 5,3. Под действием солнечного излучения на пастбище вирус гибнет летом - через 1-14 суток, осенью - через 8-20 суток.

Активно действующими дезинфекционными средствами, которые в течение 10 - С мин обезвреживают вирус ящуру, есть горячий 2 %-и раствор едкого натра или калу, 2 %-и раствор формальдегида, 20 %-и раствор свежо-гашеной извести.

Эпизоотология болезни. К ящуру более восприимчивые КРС и мелкий рогатый скот, свиньи и дикие жвачные. У верблюдов инфекция проходит безсимптомно. Редко болеют на ящур буйволы, верблюды, собаки и коты. Однокопытные животные и птица к ящуру не восприимчивые. В молодых, ослабленных и в особенности у новорожденных животных перебежал ящуру более злокачественный, чем у взрослых животных. Случаи заболевания на ящур людей случаются нечасто, преимущественно среди детей после употребления в пищу сырого молока от больных коров. Источником возбудителя инфекции являются больные свойские животные, которые начинают выделять вирус в инкубационный период и в особенности в значительном количестве во время клинического проявления болезни. В условиях отгонного животноводства источником возбудителя болезни могут быть дикие жвачные (сайгаки, антилопы), среди которых ящур нередко приобретает характер эпизоотии и распространяется на большие территории. В внешнюю среду вирус выделяется с слюной, обрывками афт, молоком, мочой, калом больных животных. С молоком вирус начинает выделяться за 7 суток к проявлению клинических признаков, с слюной и спермой - за 4 суток. Большинство секретов и екскретов есть заразными в течение 4-5 суток болезни, слюна - 11 суток. Близко 50 % животных, которые выздоровело, остаются вірусоносіями в течение 8 мес, отдельные животные - до 2 лет.

Заражение ящуром происходит вследствие контакта с больными животными, а также через контаминирлваные вирусом корма, одежда и обувь людей, мясные продукты, сырье животного происхождения, транссутоктные средства. За определенных метеорологических условий (ураган) вирус ящуру может переноситься на большое расстояние, внезапно спричинюючи болезнь за тысячи километров от неблагополучного пункта. Отмечены случаи занесения возбудителя ящуру на большое расстояние пассажирами самолетов и поездов, которые прибывают из неблагополучных относительно ящуру территорий, не придерживаясь требований карантинных ветеринарно-санитарных правил. Определенную роль в распространении возбудителя ящуру могут отыгрывать птицы, собаки, коты, грызуны, насекомого, клещи. Значительную опасность относительно распространения ящуру составляет не обеззараженное молоко, а также озадки, которые поступают из молокозаводов для скармливания сутокосятам и телятам, пищевые и боенские отходы при откорме свиней. Факторами передачи вируса ящуру могут быть контаминированы возбудителем пастбища, водопои, мясокомбинаты, молокосливные пункты, станции погрузки и разгрузка скота, автотранссутокт, трасы для перегона животных, ярмарки, рынки, а также люди, которые находятся в епизоотологичной зоне. Спонтанное заражение чувствительных к ящуру животным происходит через слизистые оболочки травного канала во время приема корма и воды, загрязненных выделениями больных и переболевших животных-вирусоносителей. В организм восприимчивых животных вирус ящуру может проникать также через слизистые оболочки носа, рта, внешних половых органов, конъюнктиву глаз, сосковые каналы вымени и сквозь поврежденную кожу.

Ящур всегда имеет тенденцию к быстрому распространению на больших географических территориях и проходит в виде эпизоотий и панзоотий. Характерным признаком ящуру есть чрезвычайно высокая контагиозность, почти 100 %-ое заболевание восприимчивых животных и довольно низкая летальность, которая составляет для большого рогатого скота 1,2 %, свиней - 8,3 %, овец - 0,78 %. Тем не менее при злокачественной форме болезни летальность молодняка может достичь 90 %. Продолжительность вспышки ящуру не превышает 21-30 суток. В случае проявления ящуру среди большого рогатого скота могут заболевать и другие виды животных, которые содержатся в хозяйстве.

При естественном ходу ящуру отмечается периодичность вспышек эпизоотий через каждые 5-7 лет, что предопределяется обновлением стада за счет новорожденного молодняка и постепенной потерей иммунитета у взрослых животных, приобретенного вследствие предшествующего переболевания. Проведение прививок и широкопланових противоэпизоотических мероприятий существенным образом влияет на закономерности возникновения и проявления этой очень опасной болезни животных.

Патогенез . На месте первичного проникновения вирус чрезвычайно быстро репродуцируется и уже через 24-36 ч образовывает первичные афты, которые часто остаются незамеченными. Отсюда с кровью и лимфой вирус разносится по всему организму, спричинюючи вирусемию и образование вторичных афт на слизистой оболочке ротовой пустоты, пятачка свиней, на коже сосков, вымени, венчику, межкопытной щели и основе рога. Иногда вирус репродуцируется в саркоплазме мышечных волокон миокарда и скелетных мышцах. В некоторых случаях вирус ящуру проявляет пантропные свойства и сутокажает паренхиматозные органы, нервную систему, железы внутренней секреции, которая предопределяет общую инфекцию, высокую температуру и развитие характерных симптомов болезни. У телят, сутокосят и ягнят раннего возраста развивается вирусемия, которая большей частью не сопровождается образованием афт, но приводит к быстрой гибели животных.

Клинические признаки и течение болезни Ящур.

Инкубационный период длится 2-7 суток. Перебежал болезни всегда острый. У Большого рогатого скота Различают доброкачественный и злокачественную формы болезни. При доброкачественной форме ящуру первым признаком болезни есть ухудшение аппетита и замедленное пережевывание жвачки. Потом появляется горячка (до 40,5-41,5 °С), ускорение пульса и дыхание, отказ от корма, резко снижается надой молока. В начале горячки слизистая оболочка рта сухая, горячая и гиперемирована. Через 2-3 суток на слизистой оболочке ротовой пустоты, языку, крыльях носа, а иногда и на носовом зеркальце появляются пузырьки (афты), сперва незначительные, размером с горошину, наполненные сначала прозрачной, а потом мутной жидкостью. Со временем афты увеличиваются к размерам греческого ореха, сливаются между собою, образовывая большие афты, которые разрываются, освобождая лимфу, которая смешивается с слюной и выделяется из рта. На месте разорванных афт получаются мучительные эрози с неравными краями, которые в течение следующих 5-8 суток укрываются эпителием и заживляются. В период горячки и появления афт и эрозий наблюдаются сильное слюнотечение, жажда, трудность во время приема корма и жвачки, характерный «прищелкивание». Кроме слизистой оболочки рта, афты могут получаться на коже венчика и межкопытной щели, на сосках вымени. Сутокажение кожи концовок предопределяет хромание и напряженную походку. При условиях стойлового удержания и достаточного количества сухой подстилки сутокаженные участки заживляются через 7-12 суток. Продолжительные перегоны животных, удержание их в сырых, загноенных помещениях могут привести к осложнениям зажигательных явлений вторичной микрофлорой, развития артритов или панариция. При сутокажении вымени на сосках обнаруживаются разной формы и размеров афты, эрозии, струпья, которые предопределяет трудности в здаиваннии молока, изменение его качества. Молоко становится слизистой, имеет горьковатый привкус. При старательном уходе и своевременном лечении сутокаженные участки вымени быстро заживляются, в другом случае возможное осложнение секундарною микрофлорой. Во всех случаях, независимо от сутокажения вымени, переболевание на ящур очень отрицательно влияет на производительность коров, снижение надоев молока по стаду может при этом достигать 50-75 %. Восстановление молочной производительности происходит медленно и затягивается иногда до 14 мес и большее (И. И. Лукашов, 1963). Во время болезни у беременных коров могут произойти аборты, задержка последа, рождение мертвых или слабых телят. При злокачественной форме ящуру кроме афтозно-ерозийных сутокажений слизистых оболочек и кожи наблюдается нарушение функции сердечно-сосудистой системы, слабость, сильное общее угнетение, клонічні судороги, одышка, хрипы. Эта форма ящуру предопределяет очень высокую летальность, которая составляет среди большого рогатого скота 50-70 %, коз - 100 %, свиней - 21,8 % (Г. Бондаренко).

У Телят К 2-месячному веку ящур проходит в безафтозній форме, характеризуется явлениями острого геморагичного гастроентериту, сепсиса и миокардитом. Наблюдаются лихорадка, судороги, слабость, нежелание сосать молозиво, сильная депрессия. Больные телята гибнут в первые 12 - С ч болезни. Летальность может достичь 60 %.

У Овец При ящуре чаще сутокажаются концовки и вымя, афты в ротовой пустоте получаются редко. Слюнотечения не бывает. У больных овец наблюдается кратковременная лихорадка, отказ от корма, замедленная жвачка, сильная хромота, чаще на передние концовки. Болезнь длится близко 2 недель, большей частью заканчивается выздоровлением. Ягнята Болеют очень тяжело, преимущественно вбезафтозной форме, с сутокажением центральной нервной системы, явлениями острого гастроентериту. У Коз Чаще сутокажается слизистая оболочка ротовой пустоты и концовки, редко вымени. Больные животные придавлены, большее лежат, тяжело передвигаются, хромают. Саливация выражена слабо. В ротовой пустоте, на нижней губе, в уголках губ обнаруживаются мелкие афты и эрозии. Нередко у заболевших коз в начале болезни наблюдается засуток, который изменяется проносом с слизью и прожилками крови. Выздоровление наступает через 10-14 суток.

У Свиней Ящур сопровождается трясучкой, угнетением, снижением аппетита, афтозно-ерозийными сутокажениями венчика, копыт, образованием афт на пятачку т вымени, очень редко - в ротовой пустоте. Больные свиньи преимущественно лежат, передвигаются ползком, на запястных суставах. Иногда наблюдается спадание копыт. Продолжительность болезни - 8-25 суток. У Сутокосят Перебежал болезни злокачественный, с высокой температурой, признаками тяжелого гастроэнтериту, иногда многочисленными афтами на пятачке и слизистой оболочке ротовой пустоты. Гибнет до 60-80 % больных сутокосят.

У Оленей Наблюдается пронос, афтозно-ерозийное сутокажение слизистой оболочки ротовой пустоты т кожи концовок. Болезнь длится 10-12 суток, потом наступает выздоравливания.

У Верблюдов Отмечается сутокажение слизистой оболочки рта и кожи концовок. Слюнотечения не бывает. Перебежал болезни доброкачественный.

У Человозраста Ящур может возникать при употреблении в пищу сырого молока от больных животных, а также в случае нарушения правил личной гигиены во время их обслуживания и лечение. Заражение происходит через слизистые оболочки и поврежденную кожу. Наблюдается общая слабость, головная боль, повышение температуры тела до 39,5-40,2 °С, слюнотечение. В роте определяется сильная болезненность, покраснение ясень и языка, образование на внутренней поверхности щек, языке и десне пузырки размером от просяного зерна к горошине иd лесного ореха с мутным ексудатом. Со временем болезненность в роте усиливается, человек не может есть и пить. Через 24-36 ч пузырьки лопаются, возникают многочисленные, соединенные между собою мучительные эрози. В первые 2-3 суток болезни возможные засуток, которые изменяются проносами. У Детей Перебежал болезни более злокачественный, ящурни пузырьки могут получаться не только в ротовой пустоте, а и на слизистой оболочке носа, конюнктиве глаз, в межпальцевых промежутках на руках и ногах, на голени и предплечье. Заболевание длится 7-10 суток. Иногда наблюдается так называемый «ящурний панариций», что заканчивается отпадением ногтей. Возможные осложнения болезни бронхопневмонией, гастроентеритом. Прогноз зазвичай благоприятный.

Патологоанатомические Изменения. При разрезе трупов животных, которые погибли от ящуру, обнаруживается острое катаральное воспаление слизистой оболочки ротовой пустоты, глотки и дыхательных путей, в молодняка раннего возраста - геморагическое воспаление кишечника и перерождение миокарда. Характерными являются афты, эрозии и язвы, которые наблюдаются на бесшерстных участках кожи, слизистых оболочках ротовой пустоты, кишечника, дыхательных путей, а также на вымени. Афтозний процесс на вымени нередко объединяется с серозно-катаральным маститом, а при осложнениях - гнойным маститом.

Регионарные лимфоузлы увеличенные, сочные, осередково или дифузно гиперемированы. В случае злокачественного хода ящуру патологоанатомические изменения проявляют также в сердечной мускулатуре - дегенеративные и некротичные, разной формы и размеров желто-серые ячейки, белые полосы и тяжі на сердце, которые предоставляют нему пятнистого вида («тигровое сердце»), бледность и вялость сердечной мышцы. Многочисленные ячейковые дистрофические и некротичные сутокажения обнаруживаются также в мышечных волокнах мускулатуры передних и задних концовок, спины, межреберных и жевательных мышц и мышц языка. Отмечаются дистрофия и ячейковый некроз в печени и нырках, гиперемия и отек легких, гиперплазия лимфоузлов. Посмертные изменения в ротовой пустоте при злокачественном ящуре выраженные слабо или их может совсем не быть. У телят, сутокосят и ягнят обнаруживаются геморагичный гастроентерит, дегенеративные изменения в печени, скелетных мышцах, иногда «тигровое сердце». У других видов животных патологические изменения при ящуре подобные к описанных у большого рогатого скота.

Диагноз Устанавливают на основании характерной клинической картины, епизоотологических данных, патологоанатомических изменений и результатов лабораторных исследований. В лабораторию присылают не менее чем 5 г стенок и содержимого афт (без признаков распада), отобранных с слизистой оболочки языка большого рогатого скота, из пятачка свиней, а также с кожи венчика и міжпальцевої щели большого и мелкого рогатого скота, свиней, верблюдов и других животных. В случае отсутствия афт берут кровь больных животных в период повышения температуры тела и кровь животных, которые переболели. От трупов молодняка всех видов отбирают лимфатические узлы председателя и заглоточного кольца, поджелудочную железу и сердечную мышцу. Для ретроспективной диагностики отбирают пробы пищеварительно-глоточной слизи. Патологический материал вмещают в флаконы с притертыми пробками и не более поздний чем через 6-12 ч из момента отбора доставляют в лабораторию для исследования. В случае невозможности доставки в указанный срок пробы замораживают или консервируют в глицерин-фосфатном буфере (рН = 7,4-7,6).

Лабораторная диагностика. Предусматривает выявление и идентификацию специфического типичного и вариантного антигена вируса ящуру непосредственно в патологическом материале, полученном от животных с клиническими признаками болезни; изоляцию и индикацию вируса с помощью биопроби на белых мышатах и морских свинках или зараженных первичных культур клеток почек телят и сутокосят ли перещеплюваної линии ВНК-21, а также проведением биопроби на большом рогатом скоте; идентификацию вируса с помощью РЗК, РДП, ІФА, РН (в культуре клеток методом перекрестного иммунитета на большом рогатом скоте, морских свинках и вакцинированном рогатом скоте). В лаборатории патологический материал немедленно исследуют за РЗК, РДП, РНГА (с антитильным еритроцитарним диагностикумом) и ELISA-тестом для выявления ящурного антигена и его типизации. Одновременно суспензией патологического материала заражают первичные культуры клеток почек телят или сутокосят, перещеплювану линию ВНК-21. В случае наличия вируса ящуру через 1-3 суток появляется ЦПД. Специфичность клеточной дегенерации контролируют за РЗК.

Для проведения биопробы используют 10 мышат 4-6-дневного возраста и 5 морских свинок, а в случае потребности проводят заражения 2 животных большого рогатого скота 18-месячного возраста и 4 сутокосят 3-месячного возраста. Через 2-3 суток в месте инокуляции инфекционного материала появляются афты. Для подтверждения специфичности кожных сутокажений осуществляют их отбор, изготовление суспензии и исследование за РЗК. Результаты исследования на ящур считают отрицательными в случае отсутствия гибели белых мышей, а также ящурного антигена в исследуемых за РЗК суспензиях.

Для определения типов вируса ящуру в стенках и содержимом афт больных на ящур животных, а также в вирусовмесных суспензиях из культур клеток и мышечной ткани инфицированных кролей и мышат применяют реакцию косвенной гемаглютинации. Определение типов вируса ящуру в патологическом материале и изучение антигенных свойств епизоотических штаммов осуществляют с помощью реакции имунодифузии. Ретроспективную диагностику ящуру проводят путем выявления и типичной идентификации специфических антител в сыворотках крови переболевших животных за РН, РНГА, РДП, РІФ и реакции серозахисту на белых мышатах 4 - 6-дневного возраста.

Дифференциальная диагностика. Предусматривает необходимость отличать ящур от других заболеваний с везикулярным синдромом. В и - спас Коров Сопровождается стадийностю развития оспенной екзантеми кожи: розеола, папула, везикула, пустула, круста. Уражуються только соски и вымя. В случае необходимости проводят микроскопию мазков из свежих папул для выявления элементарных телец и заражения куриных эмбрионов. Чума Большого рогатого скота Уражує лишь один вид животных, служит причиной высокой смертности. На слизистой оболочке ротовой пустоты никогда не бывает афт, не уражуються концовки и вымя. Заболевание часто сопровождается проносами. Проводят выделения вируса в культуре клеток, выявление специфического антигена и специфических антител с помощью РЗК и РОД; ставят биопробу на морских свинках и телятах (морские свинки к вирусу чумы не чувствительные). Везикулярный стоматит уражує не только Большой рогатый скот, А и Коней И Ишаков, На которые по потребности ставят биопробу. Проводят заражения чувствительных к вирусу везикулярного стоматита белых мышей. Некробактериоз есть хроническим заболеванием многих видов животных, проходит в виде энзоотии. Афты при этом заболевании не получаются, обнаруживаются сутокажение не только миокарда, а и печени и преджелудоков. При бактериологическом исследовании выделяют анаеробний микроб. В и - русна диарея характеризуется медленным развитием энзоотии, сутокажает лишь большой рогатый скот, преимущественно возрастом от 6 мес к 2 лет, характерным есть водянистый пронос. Выделяют вирус диареи, которая типують с помощью РН, РОД, РІФ. Везикулярная болезнь Свиней Случается лишь у этого вида животных, летальность невысокая. Возбудитель болезни очень стойкий в кислой среде (рН = 3,0-5,0) и за комнатной температуры, тогда как вирус ящуру в этих условиях полностью інактивується. К ентеровирусу стойкие морские свинки, белые мыши, кроли. Окончательный диагноз устанавливают по результатам РЗК, РОД и РІФ. В случае необходимости ставят биопробу на разных видах сельскохозяйственных животных. Везикулярную екзантему Свиней Можно дифференцировать от ящуру биопробою на морских свинках, за РЗК с везикулярной жидкостью и специфическими гипериммунными сыворотками. Применяют также РН в культуре клеток. Катаральная лихорадка Овец Характеризуется сезонностью, отсутствием контагиозности, а также специфических афтозних сутокажений слизистой оболочки ротовой пустоты, кожи, концовок. При везикулярном стоматите незаразной етиологии не бывает горячки и афт.

Лечение Ящура.

Больных животных обеспечивают мягким питательным кормом, гигроскопической мягкой подстилкой (торф, тирса), чистыми сухими помещениями, доброкачественной питьевой водой с добавкой 1 г медного кусутокоса на ведро холодной воды. Для специфического лечения используют протиящурну сыворотку реконвалесцентов (1,0- 1,5 мл на 1 кг массы животного), для молодняка - имунолактон (сутокосятам, ягнятам, телятам к 3-месячному веку - 1 г; возрастом свыше 3 мес - 0,2 г на 1 кг массы животного), а также иммуноглобулин (телятам - 5-10 мл на председателя, ягнятам и сутокосятам - 2 мл на председателя). В зависимости от клинического проявления болезни проводят симптоматичное лечение. Ротовую пустоту 2-3 разы на день промывают слабыми дезинфекционными и вяжущими растворами: 2 %-г раствором уксусной кислоты, перманганата калия - 1: 1000, фурацилину - 1: 5000, 2 %-г раствором борной кислоты, 2 %-г раствором алюминиевых галунов. Эрозии смазывают йодглицерином. В случае осложнений на концовках рекомендуется вводить в подкожную артерию бедра 500 000 ОТ пенициллина в 100 мл 0,5 %-го раствора новокаина (А. Ф. Бурденко), а при сутокажении вымени - в внешнюю клубову артерию 500 000 ОТ стрептомицина в 150 мл 0,5 %-го раствора новокаина. Сутокаженные участки кожи на концовках очищают от грязи и смазывают рыбьим жиром пополам с дегтем или эмульсиями антибиотиков. Полезно также каждый день осуществлять прогон животных через специальные ножные ванны с 2 %-г раствором формальдегида, 0,5 %-г раствором едкого натра, 2-3 %-вою эмульсией креолина или лизола. Желательно периодически обрабатывать копыта, кожу венчиков и межпальцевой(межкопытной) щели сосновым дегтем пополам с рыбьим жиром. При тяжелом ходу ящуру применяют сердечные средства.

Иммунитет. После переболевания на ящур у животных развивается стойкая невосприимчивость к повторному заражению одним и тем самым типом и вариантом вируса сроком от 1 до 10 лет. Однако в случае появления ящуру другого типа животные могут заболеть повторно. Раньше считали, что иммунитет при ящуре стерильный. В последние годы доказаны наличие персистенции вируса ящуру в организме переболевших животных вдоль одного года и дольше.

Для активной иммунизации против ящуру предложен моно - и поливалентные вакцины с лапинизованого вируса А, О, С і А48; моно - и поливалентные сорбовани вакцины из вируса О, А і С, которые выращивают на эпителии языка большого рогатого скота; моновалентные вакцины против ящуру типа А, О, С и Азия-1; эмульсионную моновалентну вакцину против ящуру типа А22 или О1 для прививки свиней. Вакцины применяют для иммунизации против ящуру разных видов восприимчивых животных с профилактической и вынужденной целью в угрожающей зоне и неблагополучных пунктах.

Большой рогатый скот, оленей, овец, коз, яков И Буйволов В зонах систематического применения вакцины щеплюють с профилактической целью единовременно. Молодняк, родившийся от иммунизированных животных, вакцинируют после исчезновения у него лактогенного пассивного иммунитета. Ревакцинацию взрослого поголовья и молодняка осуществляют в соответствии с инструкцией по использованию любой из предложенных вакцин. В угрожающих зонах, где раньше скот не вакцинировали против ящуру, и в неблагополучных пунктах животных разных вековых групп, которые не имеют признаков заболевания на ящур, щеплюють единовременно независимо от срока предшествующей вакцинации. В хозяйстве, где раньше вакцину не применяли, всех животных независимо от возраста, а также молодняк, который родился в течение месяца в неблагополучном пункте, щеплюють двукратно с интервалом 10-20 суток.

Ревакцинацию взрослого поголовья проводят через каждые 6 мес, молодняка - через 3 мес к 18-месячному веку. Для иммунизации Свиней Предложена эмульсионную моновалентну вакцина против ящуру типа А22 или О1. Применяют вакцину для иммунизации свиней с профилактической целью в угрожающих и неблагополучных относительно ящуру хозяйствах с учетом типичной принадлежности вирусу ящуру. Сутокосят, родившихся через 25 суток и большее после вакцинации свиноматок, не щеплюють. В случае сохранения угрозы возникновения ящуру их имунизируют из месячного возраста. Свиней вакцинируют единовременно в веку 3-7 мес. В неблагополучных и угрожающих относительно ящуру хозяйствах свиней независимо от возраста ревакцинують единовременно через 6 мес.

В последние годы разработаны высокоактивные инактивированые вакцины нового поколения, которые обеспечивают защиту животного от ящуру через 2-3 суток после прививки.

Профилактика и Мероприятия борьбы с Ящуром.

В нашей стране в течение последнего десятилетия заболеваний животных на ящур не наблюдалось. Однако существует большая достоверность занесения ящуру из неблагополучных относительно этого заболевания государств, с которыми постоянно поддерживаются межгосударственные и хозяйственные связи. Поэтому руководители хозяйств разных форм собственности и специалисты ветеринарной медицины обязанные систематически проводить профилактические мероприятия по ящуру и быть хорошо проинформированными об эффективных методах борьбы с этой болезнью.

В случае возникновения подозрения относительно заболевания животных на ящур нужно немедленно определить точные границы ячейки ящуру, неблагополуч-ного пункта и угрожающей зоны и организовать проведения соответствующих противоэпизоотических мероприятий. Протиящурные мероприятия предусматривают введение суровых охранно-карантинных ограничений, осуществление профилактической вакцинации и обеззараживания вируса в внешней среде. В случае угрозы занесение ящуру в благополучные зоны решающее значение имеют жесткие охранительные мероприятия, направленные прежде всего на полное прекращение любых хозяйственных или административно-общественных связей с зоной распространения ящуру. Необходимая широкая разъяснительная работа среди работников животноводства и населения об опасности ящуру, пути его занесения и профилактики.

В хозяйствах угрожающей зоны запрещается доступ на их территорию посторонних лиц и транссутокта. В случае крайней потребности доставки на неблагополучную территорию продуктов питания, кормов и медикаментов на границе зоны организовывают перевалочные пункты, где осуществляют необходимую ветеринарно-санитарную обработку людей и транссутокта. В угрожающей зоне для ухода за животными закрепляют постоянные бригады, устанавливают суровый ветеринарный надзор за заготовкой и вывозом скота, животного сырья и ввозом продукции животноводства и сельского хозяйства. В пастбищный период скот выводят в лагеря с постоянно закрепленными за ею надсмотрщиками, запрещается выпас скота индивидуального использования вместе с общественным стадом. Усиливают ветеринарный надзор на трасах прогона и местах торговли скотом, а также на предприятиях по переработке и сохранения животноводческого сырья.

Большое значение в борьбе с ящуром имеет своевременное установлении: диагноза, правильная и быстрая организация ветеринарно-санитарных карантинных и специальных мероприятий в неблагополучной зоне. Неблагополучное хозяйство или населенный пункт немедленно карантируються, вокруг него определяется угрожающая зона. В неблагополучном пункте создается специальная комиссия по борьбе с ящуром, организовываются охранно-карантинном милицейские, гражданские, а в случае потребности и военизированные посты. В сутокядке осуществления карантинных мероприятий в границах неблагополучного пункта запрещаются все перемещения животных, птицы и людей - введение и вывод животных, торговля скотом, выставки, проезд и выезд людей, заготовительные операции, общий выпас, поение и удержание больных животных вместе с здоровыми.

По решению местной власти органов самоуправление устанавливаются круглосуточные охранно-карантинные посты, закрываются все дороги, которые ведут в неблагополучный пункт, с выставлением круглосуточных сторожевых постов и указанием объездных путей и познавательных знаков, которые запрещают проезд транссутокта. Регулярно осуществляется профилактическая дезинфекция животноводческий помещений, территории и транссутокта, который обслуживает фермы. В стойловый период животных неблагополучных относительно ящуру хозяйств оставляют в помещении в условиях суровой изоляции, а в пожилой период удерживают на специально отведенном пастбище, которое закрепляют за гуртом на весь период карантина. Здесь же должны находиться и люди, которые присматривают за животными. Чтобы предотвратить распространению ящуру, в особенности суровый ветеринарно-санитарный контроль устанавливают на скотобазах, мясокомбинатах, бойнях, составах животного сырья, молокозаводах, маслобойных и сыроваренных заводах и других предприятиях по переработке животного сырья.

В случаях первичного возникновения ящуру в благополучной местности, которая находится на большом расстоянии от основной ячейки болезни, рядом с карантинными мероприятиями проводится вынужденный забой всех больных и восприимчивых к ящуру здоровым животным на временной специально организованной забойной площадке с соблюдением всех ветеринарно-санитарных правил и следующей тщательной дезинфекцией. В случае выявления первых случаев заболевание на ящур больных и подозреваемых относительно заболевания животных немедленно изолируют и лечат. В случае массового заболевания скота на ящур больных животных не выделяют, а оставляют в общем изолированном помещении и лечат. Всех клинически здоровых восприимчивых к ящуру животным карантинованой и угрожающей зон после установления типа вируса ящуру вакцинируют. Территорию ящурного ячейки, животноводческие помещения, скотные дворы и вещи ухода за животными каждый день дезинфицируют. Молоко, которое получают от коров с ящурного ячейки, перерабатывают на топленое масло. Трупы животных, которые погибли в ящурному ячейки, сжигают или зарывают в траншеи на территории неблагополучного хозяйства. Гной, остатки корма и подстилку каждый день вывозят на специально отведенное место для биотермичного обеззараживание и используют не раньше, чем на 30-ту сутоку из момента закладывания. Гной, который сохраняется зимой в замороженном состоянии, после оттаивания весной также поддают биотермичному обеззараживанию. Участка пастбищ, где выпасали больные животные, скотопрогонны тракты, которыми прогоняли больной скот, могут быть открытые для выпасы и прогона скота летом не раньше чем через 1 мес, а для вакцинированных животных - через 2 недели после вакцинации.

Карантин из неблагополучного относительно ящуру пункта снимается через 21 сутоку после последнего случая выздоровления животного и проведение тщательной окончательной дезинфекции. Вывоз скота, которая переболел на ящур, для забоя разрешается после снятия карантина. Вывоз в благополучные хозяйства для племенных целей или продажи на рынках переболевших на ящур или вакцинированных против ящуру животных разрешается не раньше чем через 12 мес после снятия карантина. В течение следующих двух лет в границах неблагополучного пункта и угрожающей зоны систематически проводят вакцинацию животных против ящуру.

Для дезинфекции во время вспышки ящуру применяют горячий 2 %-и раствор едкого натра, 1 %-и раствор формальдегида, раствор хлорной извести, которая содержит 2 % активного хлора, 5 %-и раствор хлорида йода; горячий 3 %-и раствор каустификованой содо-поташной смеси - единовременно, во время окончательной дезинфекции - двукратно. Подлогу, проходы, сточные желоба каждый день посыплют свежегашеной известью в сутокошка, стены белят 20 %-ой смесью свежегашеной извести, кормушки дезинфицируют 2 %-г раствором едкого натра. Мелкий инвентарь и предметы ухода за животными погружают на 1 ч в 2 %-и раствор едкого натра, 1 %-и раствор формальдегида, просветленный раствор хлорной извести, которая содержит 2 % активного хлора. Дезинфекционные барьеры заполняют 2 %-г раствором формальдегида, 3 %-г раствором едкого натра, 5 %-вою эмульсией дезинфекционного креолина, 4 %-вою эмульсией ксилонафту, раствором хлорной извести, которая содержит 2 % активного хлора. Окончательную дезинфекцию помещений разрешается проводить аэрозольным методом, используя 20 %-и раствор формальдегида из расчета 20 мл на 1 м3 помещение при экспозиции 3 ч, а также смесь с 3 частей формалина и 1 части креолина или ксилонафту из расчета 15 мл на 1 м3 помещение при экспозиции 3 ч.

Защита человека от заболевания на ящур. Предусматривает соблюдение правил личной гигиены во время ухода за больными на ящур животными. Потребление в неблагополучных пунктах молока и мяса разрешается лишь после их обеззараживания. Во время лечения больных на ящур людей рекомендуется постельный режим и легкая молочно-растительная диета. Не следует употреблять никаких жаропонижающих средств. В случае сильной головной боли применяют небольшие дозы пирамидона с фенацетином, кофеином, люминалом. Для местного лечения целесообразно многократно прополаскивать рот растворами борной кислоты, перманганата калия. Эрозии на ногах и руках смазывают ихтиоловой мазью и разными антисептическими эмульсиями.

«Все слава Богу, только у коров… ящур все еще не вывелся», — писал Лев Толстой своей супруге Софье Андреевне из Ясной Поляны в 1900 году. Как видим, и тогда животные болели этим вирусным заболеванием. И чаще всего — крупный рогатый скот. Болезнь несет с собой снижение удоев и потерю веса коров, большую смертность среди молодняка. Главный экономический ущерб связан с необходимостью карантинных мероприятий, когда приходится уничтожать миллионные поголовья. Человек также иногда заражается, хотя случается это редко. Как правило, заболевают дети после употребления зараженного ящуром молока.

Вирусное происхождение болезни

Описания ящура встречаются уже в середине XVI века, в работах венецианского врача и исследователя Д. Фракасторо. В настоящее время вирус встречается у животных не только в Европе и России, но и в Азиатских странах, Америке, Африке. В последний раз в 2005 году на Дальнем востоке среди коров была зафиксирована сильная вспышка ящура, перешедшего китайскую границу. Экономические потери тогда превысили 45 миллионов рублей.

В силу острого протекания и заразности ящура КРС, его довольно долго принимали за чуму крупного рогатого скота. В конце XIX столетия был открыт виновник болезни - вирус, представитель семейства Picornaviridae. В состав его входит РНК (рибонуклеиновая кислота) в белковой оболочке.

В первые двое суток после попадания вируса ящура внутрь организма животного происходит его концентрация в эпителии афтозных пузырей и в лимфе. Помимо этого, он содержится в физиологических жидкостях: слюнных и кровяных выделениях, моче и фекалиях. Данный внеклеточный агент имеет 7 типов и большое количество разновидностей.

Дальневосточная вспышка среди коров была вызвана вирусом типа Азия-1. Кроме него, широкое хождение в мире на сегодняшний день имеют типы А, О, и САТ-2. Переболевшее животное получает иммунитет только к тому типу, которым было заражено. Поэтому новые заражения коров другими разновидностями ящура не исключаются.

Устойчивость к природным факторам

Во внешней среде ящурный вирус сохраняется довольно долго. На зараженных предметах и в навозе животных – до пяти месяцев. В течение 40 дней микроб поддерживает свою активность даже после быстрой заморозки мяса коровы. До 50 дней остается жизнеспособным в молоке после охлаждения. От 30 до 40 дней он живет на шерсти и одежде.

Однако в молоке коровы при 37 градусах вирус ящура не выдерживает и 12 часов. В кисломолочных продуктах он тоже быстро погибает. Кипячение убивает его заразу сразу же, а температуру в 60 градусов микроорганизм выдерживает не более 15 минут.

Как вирус попадает в организм

Микроб переносится заболевшими животными и реконвалесцентами (вирусоносителями). Переболевшая корова может еще долго представлять опасность, превращаясь в хранителя и переносчика ящурного вируса. Наиболее вероятные пути занесения инфекции:

• контакт с зараженным или переболевшим животным;
• зараженные вирусом корма;
• использование молока инфицированных коров;
• пастбище или место для водопоя;
• аэрогенный перенос частиц инфицированных пылинок, кормов, выделений.

Источником заражения коровы может стать обслуживающий персонал, который переносит вирус на загрязненной одежде и предметах для ухода за животными. Переносчиком может стать даже транспорт, используемый на фермах. Пассивными распространителями инфекции становятся также сами неболеющие, но механически переносящие на себе вирус, собаки, кошки, домашняя птица. В число таких разносчиков ящура входят различные насекомые, в том числе, клещи и мухи.

Как работает вредитель

Проникая с пищей или через кожные покровы в организм коровы, вирус ящура закрепляется в эпителиальных тканях животного. Там же он размножается, что приводит к включению воспалительных реакций. Через сутки микробы начинают распространяться через кровь по всему организму. Общее состояние резко ухудшается, начинается лихорадка.

Зараженный организм коровы отвечает выработкой иммунитета, нейтрализуя инфекцию в органах и тканях. Однако кожные покровы наиболее беззащитны при этом заболевании, потому что менее всего обеспечиваются кровью, а, значит, и антителами.

Процесс может затронуть сердечную мышцу и мускулатуру скелета коровы. Время на борьбу с этим возбудителем ограничено.

Только своевременное распознавание заболевания и оперативное лечение от ящура может спасти поголовье скота от полного истребления.

Как определить заболевание

Первыми признаками ящура становится потеря аппетита. Температура поднимается до 40-41 градусов. Учащается сердцебиение. В эту пору болезнь можно заметить в форме нескольких первичных афт (пузырьков) размером с просяное зернышко на слизистой рта, носовых крыльях, в щели копыта, на вымени коровы. Маленькие пузырьки сливаются в крупные, размером с грецкий орех. Лопаясь, афты выделяют лимфу, и образуют болезненные эрозии. Животному трудно пережевывать корм и жвачку. Появляется характерный для ящура щелкающий, чмокающий звук и пенистая слюна в уголках рта.

Высыпания на копытах приводят к хромоте, изменению походки. Большую часть времени больные ящуром коровы предпочитают лежать, отказываются подниматься на ноги. Молоко изменяет свою консистенцию, — оно становится слизистым, приобретает горький вкус.

Ящур у маленьких телят может проходить без образования пузырьковых высыпаний. Заболевание в этом случае по своим симптомам похоже на острый гастроэнтерит. Развитие патологии может быть как доброкачественным, так и злокачественным. Во втором случае вирус наносит повреждения сердечно-сосудистой системе животного, и болезнь проявляется одышкой, хрипами, общей слабостью.

Ожидаемого улучшения на 8-12-й день не происходит. Пульс коровы учащается до 120, функциональные расстройства нервной системы принимают крайние формы – параличи, парезы. В 25-50 случаев из 100 наступает остановка сердца с летальным исходом.

Эрозии — ворота для инфекций

В период образования афт, животные требуют особого ухода. От качества их содержания во многом зависит результат лечения ящура. Возникающие эрозии становятся воротами для заражения вторичной инфекцией. Возможно развитие дерматитов, эндометритов, артритов, бронхопневмонии и других болезней, вызываемых стрептококками и стафилококками. Закупорка сосковых каналов и мастит на вымени — одна из форм проявления ящура у коров.

Нужно обеспечить животным сухую и чистую гигроскопичную подстилку, достаточное количество чистой воды, регулярное проветривание помещения. Корма должны быть мягкими. Коровам дают мучную болтушку, траву, хороший силос. Животным обеспечивается покой. Афты обрабатываются растворами:

• уксусной кислоты (2%);
• марганцовки (0,1%);
• фурацилина (0,5%).

В сложных случаях коровам показано обезболивание, чтобы животное могло принимать корма. Для этого пораженные места смазывают составом из анестезина, новокаина и медного купороса в соотношении 1:1:2, который готовится на основе вазелина и рыбьего жира.

Копыта у коровы следует содержать в чистоте, смазывая дегтем, смешанным пополам с рыбьим жиром. Йодная настойка или стрептоцид с марганцовкой помогут в случае воспалений. При правильном уходе через неделю эрозии затягиваются.

Борьба с вирусом изнутри

Вирус ящура разнообразен, поэтому специальных препаратов для лечения животных не выпускают. Оказываемая помощь, в основном, направлена на борьбу с симптомами. Кроме лекарств, для наружной обработки язв, особенно в случаях вторичного инфицирования, применяются современные антибиотики (цефалоспорин и его аналоги). Для поддержки у коровы сердечной деятельности – сердечные средства.

В качестве общеукрепляющих мер проводят внутривенные инъекции глюкозы или дают по стакану меда. В некоторых случаях корову кормят болтушкой через зонд. Решающее значение в лечении этой болезни принадлежит своевременной организации прививок.

Как защитить животных от заболевания

В неблагополучных районах для профилактики патологии проводится вакцинация против ящура крупного рогатого скота. С этой целью созданы гипериммунные сыворотки. Используется также вакцина против ящура на основе крови реконвалесцентов (вирусоносителей). Если животное вакцинировали впервые, то к концу третьей недели после прививки оно формирует иммунитет и сохраняет его в течение года. При этом стабильность антител в крови вакцинированного крупного рогатого скота длится 6 месяцев. Вакцинация – один из важных факторов ящурного благополучия России. При появлении угрозы заражения коров и для защиты от осложнений улучшаются условия содержания животных и назначается диетическое питание.

Мероприятия по борьбе с ящуром зависят от географии очага, эпизоотической картины, от традиций ведения хозяйства и других особенностей. В этом вопросе существует четыре подхода:

• отказ от вакцинации, ликвидация всех инфицированных и потенциально зараженных животных (радикальный);
• иммунизация только вокруг очага и уничтожение животных в очаге инфекции;
• проведение регулярных прививок коровам в целях профилактики в пограничных зонах, уничтожение больных в очаге и вакцинация вокруг очага заражения;
• ликвидация зараженного поголовья в сочетании с интенсивной вакцинацией и организацией карантинных мероприятий.

Первый метод эффективно уничтожает вирус ящура в зоне его первичного обнаружения. Его могут себе позволить развитые страны, так как экономический ущерб в таких случаях исчисляется миллионами долларов. Третий, основанный на регулярной иммунизации, позволяет успешно поддерживать защиту от опасного вируса в России. Последний, комплексный метод, направлен на защиту от ящура не только в очаге заражения, но и во всей эпизоотической цепи. Поэтому его признают наиболее эффективным и применяют в неблагополучных и пограничных с ними районах.

В России существует программа борьбы с вирусом ящура. Комплекс мер включает в себя мониторинг ситуации, контроль за передвижением животных, за продукцией животноводческих хозяйств в сочетании с регулярной вакцинацией. В случае обнаружения ящура вступает в силу соответствующая инструкция. Приказом губернатора в населенном пункте или фермерском хозяйстве устанавливается карантин. Ввиду высокой заразности вируса следует строго соблюдать санитарно-карантинные мероприятия, проводимые ветеринарной службой.

А вы сталкивались с проблемой ящура? Если у вас личное подсобное хозяйство, практикуете ли вы профилактические прививки на своем подворье?

Делитесь опытом, оставляйте свои комментарии.

Поставьте лайк, если статья вам понравилась.

Вам также может быть интересно