Серологические маркеры инфекций: расшифровка лабораторного ребуса. Что такое серологический анализ крови? Какой врач назначает серологический анализ крови

Серологические исследования направлены на выявление антигенов, антител, которые точно укажут на наличие или отсутствие заболевания. По уровню белковых соединений можно определить фазу болезни, ее течение, эффективность лечебных мероприятий. С помощью серологии выявляют гормональные нарушения, аутоиммунные болезни, при которых собственные клетки организма воспринимаются как чужеродные.

Для борьбы с болезнетворными агентами организм выделяет определенные белки – для каждого возбудителя определенный тип. Белковые соединения и чужеродный материал подходят друг другу как ключ к замку, при их соединении образуется комплекс, который выпадает в осадок в пробирке. В результате в однородной сыворотке появляется осадок, хлопья или она мутнеет.

Важно!

С помощью серологических исследований определяют группу крови, резус-фактор, подтверждают отцовство, выявляют источник инфекционных болезней при эпидемиях.

Виды иммуноглобулинов в исследовании

Во время серодиагностики инфекционных заболеваний наибольшее значение имеет уровень иммуноглобулинов М, А, G.

Показания к выполнению

Исследования проводят беременным для определения резус-конфликта между матерью и плодом, выявления ТОRСН инфекций – группа заболеваний, которые представляют особую опасность для плода:

1. Т – токсоплазмоз.
2. О – другие болезни: эпидемический паротит, сифилис, гепатит А, B, корь, энтеровирусные, папилломавирусные болезни, хламидиоз и др.
3. R – краснуха.
4. С – цитомегаловирусная инфекция.
5. Н – герпесвирусная инфекция.

Всем новорожденным в обязательном порядке исследование проводят для определения врожденных болезней. Общие показания для анализа у взрослых и детей:

Серологическую диагностику могут назначить до и после хирургического лечения с целью оценки количества определенных видов антител.

Плюсы, минусы серологических исследований

С помощью серодиагности проводят географический скрининг, массовую диагностику с профилактической целью для предупреждения эпидемий. Другие плюсы:

• высокая достоверность;
• быстрая расшифровка результатов – в течение 1 суток;
• большой список выявляемых заболеваний;
• безопасность анализа;
• возможность контролировать эффективность лечения по титру Аг, Ат.

Минус метода в том, что при проведении нужно учитывать инкубационный период болезни. У некоторых инфекционных заболеваний есть период «серологического окна» – вирус в организме есть, но антитела еще в кровь не поступили. Обнаружить вирус герпеса можно через 2 недели, ВИЧ – через 1, 3, 6 месяцев после заражения.

Важно!

Если верить статистике, ошибочные результаты составляют 4% от общего числа проведенных анализов. Чаще это связано с несоблюдением правил подготовки к анализу, нарушением правил проведения диагностики.

Подготовка к исследованию

Чаще биологическим материалом служит кровь, реже слюна, кал, моча, срезы тканей, альвеолярные смывы, спинномозговая, амниотическая жидкости. Серологические исследования включают в себя множество методов выявления возбудителей, от этого зависят определенные правила подготовки. Общие рекомендации перед серологическими тестами:

• последний прием пищи за 9-12 часов;
• за 24 часа ограничить употребление жирной, жареной, соленой, острой пищи, алкогольных напитков;
• в день сдачи крови нельзя есть, разрешено пить обычную негазированную воду;
• по возможности не курить за 10 часов до сдачи;
• прекратить прием любых лекарственных препаратов, в том числе витаминов. Если медикаменты назначены на постоянной основе и прекратить прием нельзя, предупредить врача;
• за 24 часа избегать стресса, исключить физические нагрузки.

Желательно, чтобы перед сдачей человек находился в спокойном состоянии, так как при любых эмоциональных проявлениях в кровь выделяются гормональные вещества, белки (кортизол, адреналин, норадреналин и др.). Если назначены инструментальные методы диагностики, то в первую очередь сдают кровь, чтобы последующие обследования не повлияли на результат анализа.

Методы серологических исследований

Способов проведения диагностики множество, как и заболеваний, которые они выявляют. Наиболее значимые:

1. Агглютинация.
2. Преципитация
3. Гемагглютинация.
4. Торможение гемагглютинации.
5. Непрямая реакция Кумбса.
6. Коагглютинация.
7. Преципитация.
8. Двойная радиальная иммунодиффузия.
9. Реакция связывания комплемента (РСК).
10. Иммунофлюоресценция (РИФ).
11. Иммуноферментный метод (ИФА).
12. Нейтрализация.

Чаще всего в лабораториях применяют ИФА, РИФ, РСК, реакции агглютинации.

Читайте также

Иммунофлюоресцентный метод (РИФ)

Для проведения исследования необходим биологический материал пациента, люминесцирующая жидкость. Второй компонент содержит антитела к предполагаемому возбудителю заболевания, которые помечены флуоресцеинизотиоционатом.

Виды РИФ:

1. Прямой – материал пациента смешивают с мечеными антителами, если это срез ткани, обрабатывают его поверхность. Если возбудитель присутствует, образуется светящийся комплекс.
2. Непрямой – проводят в 2 этапа. На первом в сыворотку или другой материал добавляют немеченые (первые) антитела. На втором вводят меченые (вторые) антитела против первых.

Полученные комплексы исследуют под люминесцентным, оптическим микроскопом ручным способом или автоматическим с помощью микрочипового цитометра. Из-за флуоресцентного вещества комплексы при затемнении излучают зеленое свечение, яркость которого отмечают плюсами от 1 до 4. Чем меньше плюсов, тем меньше комплексов с возбудителем заболевания.

Иммуноферментный метод

Как и РИФ, основан на маркировке чужеродного материала или белковых иммунных компонентов. В качестве маркировочного вещества выступают различные ферменты, которые имеют высокую специфичность, умеренную каталитическую активность, стабильность при образовании комплексов. Методы ИФА: гомогенные, гетерогенные. При первых все реакции происходят в жидком растворе. При вторых реакции проводят при участии твердого носителя.

Суть ИФА заключается в образовании комплексов иммунных белков человека с чужеродными антигенами сначала в жидком растворе, затем на твердой фазе. Под ней подразумевают прикрепление антигенов, антител к стенкам лунок полистиролового микропланшета. То есть после смешивания материала пациента с антителами против возбудителя смесь переносят на поверхность с лунками, куда прикрепляются антитела, антигены. Дальше изучают состав материала.

Реакция связывания комплимента

Для исследования необходимы: кровь или другой материал пациента, сыворотка с антителами, комплимент. Сначала смешивают кровь с сывороткой – образуется комплекс. После добавляют комплимент, который связывается с комплексом. Если связи между антиген-антитело не образуется, то комплемент остается в свободном, несвязанном состоянии. Чтобы определить его состояние в исследуемой жидкости, добавляют гемолитическую смесь (эритроциты барана с гемолитической сывороткой). Если комплемент свободен, он соединяется с гемолитической смесью – реакция отрицательная, возбудитель не обнаружен.

Реакции, связанные с агглютинацией

Самые простые серологические реакции – с применением антибактериальной сыворотки. Исследуемую кровь пациента смешивают при комнатной температуре с различными сыворотками определенной концентрации. Результат оценивают по концентрации сыворотки, при которой произошла агглютинация. С помощью агглютинации определяют группу крови, резус-факторы.

Важно!

Распространенным методом серологической диагностики являются реакции, основанные на феномене преципитации: иммуноэлектрофорез, иммунодиффузия и др.

Какие заболевания выявляет анализ

Чтобы выявить заболевание при помощи серологических методов, необходимы предположения о возбудителе на основании клинической картины, жалоб. Так как для каждого возбудителя есть свои антитела, невозможно провести анализ, выявляющий сразу всех болезнетворных агентов, которые могут быть в организме, если нет предварительного диагноза. Например, если человеку ставят предварительный диагноз вирусный гепатит, то при исследовании применяют сыворотку с антителами против гепатита. Выявляемые болезни, возбудители:

• вирусные гепатиты;
• краснуха;
• сифилис;
• паротит;
• коклюш;
• корь;
• аутоиммунные заболевания;
• герпес;
• вирус Эпштейн-Барр, клещевого энцефалита, ветряной оспы;
• хламидии;
• лямблии;
• цитомегаловирус;
• парвовирус;
• токсоплазмы;
• хеликобактер;
• легионеллы;
• микоплазмы;
• уреаплазмы;
• лямблии;
• гельминты;
• боррелии и др.

С помощью исследования выявляют любую болезнь, при которой в кровь выделяется чужеродные антигены.

Расшифровка результатов

Результаты анализов расшифровывают от 2 до 24 часов. При обнаружении в материале пациента антигенов возбудителя – результат положительный, если при добавлении в кровь антител против определенного возбудителя не образуется комплекс антитело-антиген – результат отрицательный. После выявления чужеродного белка определяют количество антител, которые связались с антигенами, чтобы определить течение, тяжесть заболевания, в бланках анализа это отмечают плюсами от 1 до 4.

При диагностике возможны ложные результаты, если исследование проведено в период «серологического окна» заболевания или нарушены правила подготовки к сдаче, выполнения исследования. При положительном результате назначают повторный анализ. При подозрении на сифилис, ВИЧ, гепатит положительный результат можно получить не меньше чем через 2 недели после контакта с инфицированным.

После постановки диагноза, назначении лечения через 2-3 недели снова берут анализ, чтобы определить титр (количество) антител. Если он нарастает – заболевание прогрессирует, количество возбудителей в организме повышается, терапия требует коррекции. Серологическая диагностика при аллергических реакциях направлена на определение иммуноглобулинов Е, которые будут прикреплены к форменных элементам в анализе крови.

Важно!

Параллельно с серологической диагностикой туберкулеза, бруцеллеза, туляремии проводят кожно-аллергические пробы.

Оценка иммунного статуса

Для определения иммунного статуса учитывают специфический, неспецифический иммунитет в целом. При помощи серологических методов определяют уровень всех иммуноглобулинов, активность, уровень Т, В-лимфоцитов, включая их подкасты. Оценку статуса проводят в 2 этапа. На первом (клиническом) в бланке отмечают: как часто человек болеет инфекционными заболеваниями, сопровождаются ли они осложнениями, как долго поддаются медикаментозному лечению, есть ли хронические заболевания.

Второй этап включает в себя 2 вида тестов. В первый входит определение количества всех иммуноглобулинов, Т, В-лимфоцитов. При выявлении отклонений иммунитета от нормы переходят ко второму (глубокому) тесту, чтобы определить причину нарушения защитных сил организма. Определяют все субпопуляции Т, В-лимфоцитов. Второй тест – процесс трудоемкий, выполнение может занять до 10 дней.

При помощи серологических исследований выявляют огромное количество заболеваний, при которых в кровь выделяются чужеродные компоненты. Способов серодиагностики множество, все они имеют высокую эффективность. Изучение уровня иммуноглобулинов помогает оценить восприимчивость организма к определенным инфекциям для проведения прививочных мероприятий и других профилактических мер.

СЕРОЛОГИЧЕСКИЕ ИССЛЕДОВАНИЯ (лат. serum сыворотка + греч. logos учение) - методы иммунологии, изучающие специфические свойства крови человека или животных с целью выявления антигенов или антител с помощью серологических реакций.

Начало С. и. положено в конце прошлого столетия, после того как было установлено, что соединение антигена с антителом (см. Антиген - антитело реакция) сопровождается рядом доступных визуальному наблюдению феноменов - агглютинацией (см.), преципитацией (см.) или лизисом. Появилась возможность специфического распознавания антигенов (см.) или антител (см.), если один из этих компонентов известен.

В 1897 г. Ф. Видаль сообщил, что сыворотка крови больных брюшным тифом избирательно агглютинирует брюшнотифозные бактерии и поэтому эта реакция (см. Видаля реакция) может быть применена для лаб. диагностики брюшного тифа. В том же году было показано, что фильтраты культур чумных, брюшнотифозных и холерных бактерий при соединении с соответствующими иммунными сыворотками образуют хлопья, или преципитат.

Реакция преципитации оказалась пригодной для обнаружения любых белковых антигенов. В 1900-1901 гг. К. Ландштейнер нашел, что в эритроцитах людей имеются два различных антигена (А и В), а в сыворотках крови два агглютинина (а и Р), что способствовало применению реакции гемагглютинации для определения групп крови (см.).

Реакция агглютинации для определения группы крови и резус-фактора применяется в акушерской практике, при гемотрансфузиях и трансплантации тканей. Антитела против резус-фактора (см.) представляют собой неполные антитела, они не способны к прямой реакции с резус-положительными эритроцитами, поэтому для их обнаружения используют реакцию Кумбса (см. Кумбса реакция), основанную на выявлении неполных антител с помощью антиглобулиновых сывороток. К эритроцитам известной специфичности добавляют исследуемую сыворотку крови, а вслед за этим антиглобулиновую сыворотку против IgG (непрямая реакция Кумбса). Fab-фрагменты неполных антител исследуемой сыворотки крови присоединяются к эритроцитам, а к свободным Fc-фрагментам этих антител присоединяются антитела против IgG, и происходит агглютинация эритроцитов. Для диагностики гемолитической анемии используют прямую реакцию Кумбса, В организме таких больных эритроциты соединяются с циркулирующими в крови антителами против резус-фактора. Чтобы их выявить, к эритроцитам, взятым у больного, добавляют антитела против IgG. Появление агглютинации эритроцитов подтверждает диагноз болезни.

Реакция торможения гемагглютинации - РТГА (см. Гемагглютинация) - основана на феномене предотвращения (торможении) иммунной сывороткой гемагглютинации эритроцитов вирусами. Феномен вирусной гемагглютинации не является серол. реакцией и происходит в результате соединения вируса с рецепторами эритроцитов, однако РТГА представляет собой серологическую реакцию, используемую для выявления и титрования противовирусных антител. РТГА - основной метод серодиагностики гриппа, кори, краснухи, эпидемического паротита, клещевого энцефалита и других вирусных инфекций, возбудители к-рых обладают гемагглютинирующими свойствами.

Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинаций, В ней используют эритроциты или нейтральные синтетические хчатериалы (напр., частицы латекса), на поверхности к-рых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела (см. Бойдена реакция). Агглютинация их происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами, называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами (см.) и используют для выявления антигенов:

Реакция пассивной гемагглютинации применяется для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.). Реакция пассивной гемагглютинации по чувствительности не уступает методу выделения вируса при ареновирусных болезнях (см.), в частности при лимфоцитарном хориоменингите. Вирусный антиген лимфоцитарного хориоменингита выявляется у вирусоносителей (домовых мышей) в реакции пассивной гемагглютинации с суспензиями извлеченных органов, разведенными в десятки тысяч раз. При сальмонеллезе в реакции пассивной гемагглютинации определяются бактерии при концентрации до нескольких сотен микробных тел в 1 г фекалий, дизентерийные бактерии в пищевых продуктах выявляются при содержании в 1 г материала не менее 500 микробных тел.

Реакция пассивной гемагглютинации используется в диагностике и профилактике вирусного гепатита В. В Советском Союзе для выявления HBs-антигена (см. Австралийский антиген) в крови больных с острым гепатитом В производится диагностикум, представляющий собой эритроциты кур, сенсибилизированные козьим иммуноглобулином против HBs-антигена. Каплю диагностикума соединяют с равным объемом сыворотки крови обследуемых людей, и, если в ней присутствует HBs-антиген, происходит агглютинация. Реакция способна уловить до 1,5 нг/мл HBs-антигена. Для обнаружения HBs-антител используют эритроциты с сорбированным на них HBs-антигеном, выделенным из крови больных. Реакцию пассивной гемагглютинации применяют также для выявления повышенной чувствительности больного к лекарственным препаратам и гормонам, напр, пенициллину или инсулину. В этом случае эритроциты 0 группы крови человека сенсибилизируют лекарственным веществом и затем используют для выявления к нему агглютининов в сыворотке крови больного.

Реакцию пассивной гемагглютинации используют для выявления гонадотропного гормона в моче с целью установления беременности (см. Хорионический гонадотропин). Для этого стандартная сыворотка к этому гормону инкубируется с исследуемой мочой. При последующем добавлении эритроцитов с сорбированным на них гормоном агглютинация не наступает (положительный ответ), т. к. содержащийся в моче гормон нейтрализовал агглютинирующие антитела.

Реакции, основанные на феномене преципитации

Их используют для определения самых разнообразных антигенов и антител. Простейшим примером качественной реакции является образование непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело в пробирке. Широко применяются различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлоню, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлектрофорез), к-рые носят одновременно качественный и количественный характер (см. Иммунодиффузия , Иммуноэлектрофорез).

Для постановки двойной иммунодиффузии наливают слой растопленного геля на стеклянную пластинку и после затвердевания вырезают лунки диаметром 1,5-3 мм. В расположенные по кругу лунки помещают исследуемые антигены, а в центральную лунку - иммунную сыворотку известной специфичности. Диффундируя навстречу друг другу, гомологичные сыворотки и антигены образуют преципитат. При радиальной иммунодиффузии (по методу Манчини) иммунную сыворотку вносят в агар. Антиген, помещенный в лунки, диффундирует через агар, и в результате преципитации с иммунной сывороткой вокруг лунок образуются непрозрачные кольца, внешний диаметр к-рых пропорционален концентрации антигена. Модификацию этой реакции используют в диагностике гриппа для распознавания IgM- и IgG-антител (см. Иммуноглобулины). В агар вносят гриппозный антиген, а в лунки сыворотки крови. Затем пластины обрабатывают иммунными сыворотками против IgM- или IgG-антител, что способствует выявлению реакции соответствующих антител с антигенами. Метод позволяет одновременно определять титры антител и принадлежность их к определенному классу иммуноглобулинов.

Разновидностью иммуноэлектрофореза является радиоиммунофорез. В этом случае после электрофоретического разделения антигенов в канавку, вырезанную параллельно движению антигенов в геле, наливают сначала меченную радиоактивным йодом иммунную сыворотку против определяемых антигенов, а затем иммунную сыворотку против IgG-антител, к-рая преципитирует образовавшиеся комплексы антитела с антигеном. Все несвязавшиеся реагенты вымывают, а комплекс антиген - антитело обнаруживают методом авторадиографии (см.).

Реакции с участием комплемента. Реакции с участием комплемента (см.) основаны на способности субкомпонента комплемента Cl(Clq) и затем других компонентов комплемента присоединяться к иммунным комплексам.

Реакция связывания комплемента позволяет титровать антигены или антитела по степени фиксации комплемента комплексом антиген - антитело. Эта реакция состоит из двух фаз: взаимодействия антигена с испытуемой сывороткой крови (исследуемая система) и взаимодействия гемолитической сыворотки с бараньими эритроцитами (индикаторная система). При положительной реакции в исследуемой системе происходит связывание комплемента, и тогда при добавлении сенсибилизированных антителами эритроцитов не наблюдается гемолиза (см. Реакция связывания комплемента). Реакция широко применяется для серодиагностики висцерального сифилиса (см. Вассермана реакция) и вирусных инфекций (см. Вирусологические исследования).

Цитолиз. Антитела против клеточных структур могут при участии комплемента растворять клетки, несущие эти структуры. Лизис эритроцитов легко оценивать по степени и интенсивности освобождения гемоглобина. Лизис нуклеарных клеток оценивают путем подсчета процента мертвых клеток, к-рые не окрашиваются метиленовым синим. Часто также используют радиоактивный хром, к-рый предварительно химически связывают с клетками. Число разрушенных клеток определяют по количеству несвязанного хрома, освобождающегося при лизисе клеток.

Реакция радиального гемолиза эритроцитов может протекать в геле. Взвесь эритроцитов барана помещают в агарозный гель, добавив туда комплемент; в застывшем на стекле слое делают лунки и вносят в них гемолитическую сыворотку. Вокруг лунок в результате радиальной диффузии антител будет образовываться зона гемолиза. Радиус зоны гемолиза прямо пропорционален титру сыворотки. Если сорбировать на эритроцитах какой-либо антиген, напр, гликопротеиновый гемагглютинин вируса гриппа, краснухи или клещевого энцефалита, то можно воспроизвести феномен гемолиза иммунными сыворотками к этим вирусам. Реакция радиального гемолиза в геле нашла применение в диагностике вирусных инфекций благодаря простоте постановки, нечувствительности к сывороточным ингибиторам, возможности титровать сыворотки крови по диаметру зоны гемолиза, не прибегая к серийным разведениям.

Иммунное прилипание. Эритроциты, тромбоциты и другие клетки крови имеют на поверхности рецепторы к третьему компоненту комплемента (C3). Если к антигену (бактерии, вирусы и др.) добавить соответствующую иммунную сыворотку и комплемент, то образуется комплекс антиген - антитело, покрытый C3-компонентом комплемента. При смешивании с тромбоцитами благодаря C3-компоненту комплемента комплекс антиген - антитело осядет на клетках и вызовет их агглютинацию (см. Иммунное прилипание). Эта реакция применяется для определения антигенов системы HLA (см. Иммунитет трансплантационный) и при изучении ряда вирусных -инфекций (клещевой энцефалит, лихорадка денге), к-рые сопровождаются иммунопатол. процессами и циркуляцией в крови вирусных антигенов в комплексе с антителами.

Реакция нейтрализации основана на способности антител нейтрализовать нек-рые специфические функции макромолекулярных или растворимых антигенов, напр, активность ферментов, токсины бактерий, болезнетворность вирусов. В бактериологии эта реакция используется для обнаружения антистрептолизинов, антистрептокиназы и антистафилолизинов. Реакцию нейтрализации токсинов можно оценивать по биол. эффекту, так, напр., титруют антистолбнячные и антиботулинические сыворотки (см. Токсин - антитоксин реакция). Смесь токсина с антисывороткой, введенная животным, предотвращает их гибель. Различные варианты реакции нейтрализации применяют в вирусологии. При смешивании вирусов с соответствующей антисывороткой и введении этой смеси животным или в клеточные культуры патогенность вирусов нейтрализуется.

Реакции с использованием химических и физических меток

Иммунофлюоресценция, разработанная Кунсом (А. Н. Coons) в 1942 г., заключается в использовании для серол. реакций меченных флюорохромом сывороток (см. Иммунофлюоресценция). Меченная флюорохромом сыворотка образует с антигеном комплекс антиген - антитело, к-рый становится доступным наблюдению под микроскопом в ультрафиолетовых лучах, возбуждающих свечение флюорохрома. Реакцию прямой иммунофлюоресценции используют для изучения клеточных антигенов, выявления вируса в зараженных клетках и обнаружения бактерий и риккетсий в мазках. Так, для диагностики бешенства отпечатки кусочков мозга животных, подозреваемых на вирусоносительство, обрабатывают люминесцирующей антирабической сывороткой. При положительном результате в протоплазме нервных клеток наблюдаются глыбки ярко-зеленого цвета. На обнаружении антигенов вирусов в клетках отпечатков со слизистой оболочки носа основана экспресс-диагностика гриппа, парагриппа и аденовирусной инфекции.

Более широко применяется метод непрямой иммунофлюоресценции, основанный на выявлении комплекса антиген - антитело с помощью люминесцирующей иммунной сыворотки против IgG-антител и используемый для обнаружения не только антигенов, но и титрования антител. Метод нашел применение в серодиагностике герпеса, цитомегалип, лихорадки Ласса. В лаборатории должен храниться при г°-20° запас препаратов антигенсодержащих клеток, напр, выращенные на кусочках тонкого стекла и зараженные вирусом клетки VERO или куриные фибробласты, зафиксированные ацетоном. На препараты наслаивают исследуемую сыворотку крови, помещают препарат в термостат при f 37° для образования иммунных комплексов, а затем после отмывания несвязавшихся реагентов выявляют эти комплексы меченой люминесцирующей сывороткой против глобулинов человека. Применяя меченые иммунные сыворотки против IgM-или IgG-антител, можно дифференцировать тип антител и обнаруживать ранний иммунный ответ по наличию IgM-антител.

В энзим - иммунологическом методе применяют антитела, конъюгированные с ферментами, гл. обр. пероксидазой хрена или щелочной фосфатазой. Чтобы обнаружить соединение меченой сыворотки с антигеном, добавляют субстрат, разлагающийся присоединенным к сыворотке ферментом с появлением окрашивания в желто-коричневый (пероксидаза) или желто-зеленый (фосфатаза) цвет. Используют также ферменты, разлагающие не только хромогенный, но и люмогенный субстрат. В этом случае при положительной реакции появляется свечение. Подобно иммунофлюоресценции, энзимиммунологический метод применяют для обнаружения антигенов в клетках или титрования антител на антигенсодержащих клетках.

Наиболее популярной разновидностью энзим-иммунологического метода является иммуносорбция. На твердом носителе, к-рым могут быть целлюлоза, полиакриламид, декстран и различные пластмассы, сорбируют антиген. Чаще носителем служит поверхность лунок микропанелей. В лунки с сорбированным антигеном вносят исследуемую сыворотку крови, затем меченную ферментом антисыворотку и субстрат. Положительные результаты учитывают по изменению цвета жидкой среды. Для обнаружения антигенов на носитель сорбируют антитела, затем вносят в лунки исследуемый материал и проявляют реакцию меченной ферментом антимикробной сывороткой.

Радиоиммунологический метод основан на применении радиоизотопной метки антигенов или антител. Первоначально он был разработан как специфический метод измерения уровня циркулирующих в крови гормонов. Тест-системой являлся меченный изотопом гормон (антиген) и антисыворотка к нему. Если к такой антисыворотке добавить материал, содержащий искомый гормон, то он свяжет часть антител, при последующем внесении меченого титрованного гормона с антителами свяжется уменьшенное по сравнению с контролем его количество. Результат оценивают по сопоставлению кривых связанной и несвязанной радиоактивной метки. Эта разновидность метода носит название конкурентной реакции. Существуют и другие модификации радиоиммунологического метода. Радиоиммунологический метод - наиболее чувствительный метод определения антигенов и антител, используемый для определения гормонов, лекарственных веществ и антибиотиков, для диагностики бактериальных, вирусных, риккетсиозных, протозойных заболеваний, исследования белков крови, тканевых антигенов.

Сравнительная характеристика и использование методов серологических исследований в медицинской практике

Методы С. и. непрерывно совершенствуются в направлении повышения чувствительности и универсальности использования. Изначально серол. диагностика основывалась на выявлении антител. С появлением в середине 20 в. реакций иммунофлюоресценции и пассивной гемагглютинации, обладающих большей чувствительностью, появилась возможность обнаруживать не только антитела, но и антиген непосредственно в материале от больных. Энзим-иммунологический и радиоиммунологический методы, по чувствительности на 2-3 порядка превышающие иммунофлюоресценцию и пассивную гемагглютинацию, приближаются к методам биол. обнаружения бактерий и вирусов. Область их применения для обнаружения как антигенов, так и антител теоретически не ограничена.

Серодиагностика инф. болезней базируется на появлении антител к выделенному или предполагаемому возбудителю независимо от того, был ли обнаружен возбудитель в острой стадии болезни. Исследуют пары сывороток крови, взятых в начале болезни и 2-3 нед. спустя. Прирост антител во второй сыворотке крови не менее чем в 4 раза по сравнению с первой является диагностически значимым. Имеет также значение, каким классом иммуноглобулинов представлены антитела. IgM-антитела обнаруживают в конце острого периода болезни и в ранней стадии реконвалесценции. IgG-антитела появляются в более поздние сроки реконвалесценции и циркулируют долго. Если у женщины в первом триместре беременности обнаруживают IgM-антитела к вирусу краснухи, то это служит основанием для прерывания беременности, т. к. в этот период плод особенно чувствителен к вирусу. При разных инф. болезнях избирательно используют наиболее специфические и удобные в исполнении методы.

С. и. широко применяют в эпидемиологии. Систематический сбор и исследование образцов крови различных групп населения позволяют уяснить контакты населения с источником возбудителей инф. болезней. Изучение уровня коллективного иммунитета позволяет выявлять группы повышенного риска и планировать прививочные мероприятия, изучать географическое распространение инфекций. С. и. различных возрастных групп населения позволили, напр., ретроспективно выявить циркуляцию разных вариантов вируса гриппа в определенные периоды времени.

С. и. имеют большое значение в изучении наследственных болезней (см.) и аутоиммунных болезней, сопровождающихся появлением ткане- и органоспецифических антител, разрушающих соответствующие клетки-мишени, а также в онкологии для обнаружения опухолевых антигенов. Так, иммунодиагностика рака печени основана на определении в сыворотке крови больных альфа-фетопротеина и других эмбриональных антигенов методом иммунодиффузии и радиоиммунологическим методом.

Значительный прогресс науки в изучении тонкой антигенной структуры клеточных антигенов, антигенов бактерий и вирусов достигается благодаря применению в серол. реакциях моноклональных антител, к-рые можно получать к отдельным детерминантам антигена.

Библиография: Методы исследований в иммунологии, под ред. И. Лефковитса и Б. Перниса, пер. с англ., М., 1981; Руководство по иммунологии, под ред. О. Е. Вязова и Ш. X. Ходжаева, М., 1973; Руководство по клинической лабораторной диагностике, под ред. В. В. Меньшикова, М., 1982; Immunology, ed. by J.-F. Bach, N. Y., 1978.

С. Я. Гайдамович.

Серологический анализ крови представляет собой фундаментальный метод исследования, осуществляемый в целях быстрого и достоверного выявления микробов, инфекций и вирусов в организме человека. Помимо этого благодаря данному методу можно определить весь перечень существующих болезней, возникших в результате понижения иммунитета.

За счет серологического анализа осуществляется изучение забранной у пациента крови на ВИЧ, сифилис и иные опасные недуги. К тому же исследование необходимо в случае утверждения группы крови пациента и для определения специфичности белков.

Как отмечалось ранее, анализ рекомендован для диагностирования инфекционных недугов и установления стадии течения воспалительного процесса. Благодаря серологической химической реакции можно определить уровень взаимодействия антигенов и антител, отвечающих за результат.

Данный анализ применяется:

1. При определении числа антител, борющихся с возбудителем заболевания: в ходе анализа сыворотку крови смешивают с антигеном возбудителя болезни, после чего смотрят на происходящую реакцию.
2. Обратная ситуация – развивающуюся инфекцию обнаруживают за счет находящихся антигенов, выявляемых путем дополнения в кровь антител.
3. В случае установления группы крови.

При плохой свертываемости крови и в случае гиперкоагуляции могут произойти опасные последствия, связанные с сердечной деятельностью.

Необходимость в серологических исследованиях возрастает, когда у пациента есть подозрения на наличие половой инфекции и других заболеваний. В полученном результате пройденного анализа есть информация о наличии в крови антител к данному типу бактерий либо вирусов. Это болезни печени, корь, вирус иммунодефицита человека, герпес и др. В случае выявления антител доктор выносит заключение пациенту и определяет дальнейший курс терапии. Если есть необходимость, нужно будет пройти дополнительные исследования.

Забор материала осуществляется из локтевой вены. Анализ берется на голодный желудок с утра. Вместе с тем перед сдачей биохимического анализа на гепатит следует исключить из ежедневного рациона все овощи и фрукты, имеющие яркую окраску. Если потребуется подтверждение результатов готового анализа, можно назначить вторичное обследование без спецподготовки.

Расшифровка серологического анализа

Данное лабораторное исследование показано пациентам при появлении трудностей дифференциальной диагностики различного рода инфекций. В данном случае только серологический анализ сможет определить тип возбудителя инфекции и помочь врачу определить диагноз заболевания. К тому же огромная польза данной методики отражается при подборе лекарственной терапии пациенту, потому что возбудители многих болезней сильно различаются своей чувствительностью к действию антибиотиков и иных лекарственных средств.

Благодаря серологическому исследованию можно без труда определить наличие у человека болезни, которая была вызвана попаданием в организм скрытой инфекции. Окончив процедуру сбора материала, лаборанты выполняют расшифровку показателей, позволяющих опытным врачам в полном объеме исследовать патологии, возникшие в организме. В случае отсутствия в крови антител у человека не развивается инфекционное заболевание. При этом результат анализа будет положительным. Но это редкий случай. Как правило, при наличии симптомов болезни серологический анализ служит доказательством наличия опасной патологии. В этом случае процесс дублируется. Изначально выявляют нахождение в организме мелких возбудителей инфекции. Далее по числу антител идентифицируют степень развития воспалительного процесса.

Нормой при осуществлении данного теста считается нулевое содержание антител. Значение всегда будет означать наличие в организме патологии. В связи с этим пациенту требуется прохождение дополнительных исследований для подтверждения поставленного диагноза.

Особенности серологического исследования на сифилис, ВИЧ и гепатит

Анализ на сифилис предусматривает обнаружение белков, отвечающих за поступление в организм человека возбудителя инфекции – трепонемы бледной. Биологическим материалом в данном случае является сыворотка крови. Перед сдачей крови за 4 дня следует прекратить прием сердечных лекарственных средств и отказаться от любой алкогольной продукции. Следует отметить, что инфицирование можно установить только по истечении 1,5-2 месяцев с момента заражения. Если данный анализ выполняет беременная женщина, она должна быть готова к ложноположительному результату.

Основанием для проведения серологического анализа на гепатит могут стать такие симптомы:

• беспричинная переутомляемость и бессилие организма;
• плохой аппетит либо его отсутствие;
• рвота;
• изменения оттенка мочи и кала;
• желтушность кожи лица.

Помимо этого диагностирование гепатита считается необходимым при прохождении профосмотра либо в период обследования при беременности.

Если у человека было определено положительное заключение анализа на ВИЧ-инфекцию, это не значит, что он инфицирован СПИДом. Если с момента заражения прошло менее 2 месяцев, присутствие в крови антител к вирусу иммунодефицита не может позволить подвести итог, свидетельствующий о развитии заболевания. Для этого необходимо повторить процедуру. Анализ на ВИЧ осуществляется в обязательном порядке при беременности в момент первого посещения и на 30 неделе срока.

Иммуноферментный анализ крови

Одной из популярных разновидностей серологических исследований считается иммуноферментный анализ, осуществляемый для эффективного контроля над числом антигенов и антител в сыворотке крови человека. К тому же с помощью данного метода возможно определение содержания гормонов, иммунологических комплексов и иных биологических компонентов.

При проникновении в ткань и жизненно важные органы человека биоорганических веществ иммунитет не допускает их влияния на здоровье за счет антител и иммуноглобулинов. В результате их воздействия в организме образуется комплекс антиген-антитело. Только его всесторонний анализ будет являться важной составляющей иммуноферментного метода.

В качестве основного материала, необходимого для выполнения исследования, выступает кровь пациента. В некоторых случаях, чтобы распознать вид заболевания или подобрать терапию, для анализа берут цереброспинальную и амниотическую жидкость. Иммуноферментный анализ крови как составляющее звено серологии основывается на детальном изучении кровяных молекул и иммуноглобулинов. Их особенностью является способность к обнаружению и уничтожению возбудителей инфекций совместно с определенным антигеном.

К преимуществам этого метода относят возможность определения болезни на ранних этапах ее развития, быстроту и точность результата, низкую стоимость и исключение подготовки к исследованию.

Недостатков метода немного: возможно получение ложноотрицательного результата, что требует в дальнейшем повторного тестирования.

Перед тем как сдавать какой-либо лабораторный анализ, необходимо соблюдать правила подготовки. Сбор материала должен проводиться исключительно в санитарных условиях. К тому же необходимо не допустить попадания в кровь постороннего вещества. Важным условием каждого анализа на инфекции является сдача крови исключительно натощак. При этом за день до сдачи анализа не рекомендуется употреблять жирную и острую пищу, алкогольную продукцию и сладкие напитки. Дополнительно необходимо избегать стрессовых ситуаций и любых физических нагрузок. В любом случае перед тем, как принять решение о сдаче крови на исследование, нужно пройти медицинское обследование у лечащего врача.

Услышав жалобы пациента, доктор сможет порекомендовать целесообразность сдачи серологического анализа крови.

Серология (от лат. serum — «сыворотка», logos — «наука») представляет собой раздел иммунологии, который изучает специфику взаимодействия сывороточных антител с антигенами.

Основа диагностики — обнаружение специфических антител, которые образуются в качестве реакции на инфицирование организма определенным антигеном. В зависимости от того, какие антитела обнаружены в крови, делается вывод о характере инфекции, а количество этих антител говорит о степени активности инфекционного заболевания.

Материал, взятый на исследование в рамках серологического анализа крови, изучается на предмет , и других опасных заболеваний — герпеса, кишечных инфекций, краснухи, токсоплазмоза, хламидиоза, кори, хламидиоза. Кроме того, это исследование позволяет утвердить группу крови, определить специфичность белков.

Итак, серологические исследования проводят:

• если поставлен предварительный диагноз и теперь требуется его подтверждение. Исследование основывается на добавлении соответствующего антигена в сыворотку крови. Ответная реакция позволяет сделать вывод о налиии или отсутствии заболевания;
• если диагноз поставить не удается. В рамках исследования в кровь добавляют антитела и определяют вид антигенов, что позволяет определить конкретное заболевание;
• если необходимо .

Таким образом серологический анализ крови помогает поставить диагноз или назначить наиболее эффективное лечение — при минимальных временных и финансовых затратах.

К достоинствам серологических исследований можно отнести:

• возможность выявления патологических микроорганизмов на ранних стадиях инфекции;
• контроль развития заболевания и уровень эффективности проводимой терапии;
• отсутствие необходимости специальной подготовки перед взятием биоматериала;
• оперативность. Результат будет доступен через два-три часа, что в условиях стационарного лечения очень важно;
• финансовую доступность реагента, что позволяет проводить пробы так часто, как это нужно;
• отсутствие противопоказаний.

Как проводится серологическое исследование

Забор крови проводится из локтевой вены. Важный момент — кровь берется не шприцом, а самотеком — в вену вводится игла без шприца и собирается в пробирку до пяти мл крови. Проводится процедура с утра .

В зависимости от реакций, которые лежат в основе исследования, выделяют несколько видов процедур:

1. реакция нейтрализации . Основывается на свойстве антител иммунной сыворотки реагировать как нейтрализующее средство на микроорганизмы или токсины, предупреждая их негативное воздействие на организм;
2. реакция агглютинации . Может быть прямой или непрямой. В первом случае речь идет об изучении сыворотки крови на предмет присутствия антител (осуществляется вброс убитых микробов в материал, и оценивается реакция — если есть осадок в виде хлопьев, реакция положительная), непрямая реакция основана на введении в материал эритроцитов с адсорбированными на них антигенами (фестончатый осадок говорит о положительной реакции);
3. реакция преципитации . Раствор антигена наслаивается на иммунную сыворотку (выполняет роль жидкой среды). Используется растворимый антиген. Если комплекс антиген-антитело выпадает в осадок, реакция считается положительной;
4. реакция с участием комплемента. Область применение — обнаружение инфекционных заболеваний. Активируется комплемент и исследуются реакции;
5. реакция с мечеными антигенами и антителами . Основывается на том, что антигены тканей или микробы, обработанные особым образом, начинают излучать свет под воздействием УФ-лучей. Метод широко применяется не только при диагностике антигенов, но также для определения гормонов, ферментов, лекарственных средств.

К сдаче анализа необходимо подготовиться: за четыре дня пациент должен отказаться от приема сердечных препаратов, нужно также исключить алкоголь в любом его проявлении, острую и жирную еду, сладости, ограничить физические усилия, избегать стрессов.

Если не соблюдать эти правила, повышается риск ложноположительного результата. Перед назначением повторной сдачи анализов врач обязательно должен выяснить, что делал пациент за день до процедуры, и дать рекомендации по правильной подготовке к обследованию.

Серологический анализ: расшифровка

Серологическое исследование крови — анализ, который позволяет определить/подтвердить тип возбудителя инфекции, помогает специалисту поставить диагноз. Это незаменимая помощь, если врач не может подобрать лекарственную терапию, так как возбудители различных заболеваний отличаются разной чувствительностью к действию конкретных лекарств и антибиотиков.

После того, как процедура сбора материала закончена, лаборанты приступают к следующему этапу — расшифровывают показатели. Так, если в крови у пациента антитела не обнаружены, можно делать вывод, что в организме нет инфекций — результат анализа в таком случае положительный.

Но такое положение вещей, скорее, исключение из правил: если есть симптомы заболевания, серологические исследования выявляют и доказывают наличие серьезной патологии в организме.

Сначала в организме с помощью анализа находят возбудителей заболеваний, далее оценивают количество антител, на основании чего делают вывод о том, насколько серьезно развита инфекция.

Серологическое исследование на гепатит, ВИЧ, сифилис: особенности

Сифилис . При проведении анализа на сифилис специалисты ищут белки, отвечающие за поступление в человеческий организм возбудителя инфекции — речь идет о трепонеме бледной. В качестве биологического материала в этом случае выступает сыворотка крови.

. Вирусные гепатиты — серьезные инфекционные заболевания, опасность которых заключается в том, что они достаточно долгое время могут жить в организме, никак себя не проявляя. Выявить заболевание в ранней фазе, когда оно лучше поддается лечению, можно проведя анализ на маркеры — маркеры появляются в крови после перенесенного заболевания или введения вакцины.

Нужно понимать , что выявление возбудителя возможно только через 1,5-2 месяца после инфицирования. Если анализ сдает беременная женщина, возможен ложноположительный результат.

Рекомендуем к просмотру медицинский сайт https://tabletix.ru/ . На сайте найдете полезную информацию, врачебные мнения.
Если вы наблюдаете один или несколько из симптомов, указанных ниже, стоит задуматься о сдаче серологического анализа:

• рвота;
• плохой аппетит или его отсутствие;
• беспричинное бессилие организма, переутомление;
• желтоватый цвет лица;
• изменения цвета кала и мочи.

ВИЧ. Если показал положительный результат, это не говорит о том, что пациент инфицирован СПИДом. Если заражение произошло недавно (не более двух месяцев назад), наличие антител не позволяет определить факт развития заболевания. Назначается повторное исследование.

Серологический анализ крови — важнейший метод исследования, основное назначение которого заключается в оперативном выявлении вирусов, инфекций, микробов в организме.

Этот уникальный лабораторный «инструмент» позволяет определить любое заболевание, которое является следствием угнетения иммунитета, поэтому не ленитесь, а регулярно сдавайте анализ, чтобы иметь возможность вовремя выявить болезнь и быстро от нее избавиться.

8 134

Для выявления большинства заболеваний требуется сдавать различные анализы крови, которые помогут определить не только наличие опасной патологии, но и установить эффективность лечения. Серологический анализ крови - распространенный метод лабораторного исследования, который позволит определить, есть ли вирусы, инфекции и микробы в организме человека. Данное обследование способно выявить заболевания, возникающие при ослаблении в организме защитных реакций, оно поможет установить наличие даже такого опасного заболевания, как ВИЧ.

Что такое серологический анализ

Серологией называют в медицине раздел науки иммунологии, который изучает реакцию антигенов на антитела. Данная отрасль медицины изучает плазму крови, а также ее иммунологические возможности. Анализ крови на серологические реакции определяет наличие и поведение особых антител, которые человеческий организм вырабатывает для борьбы с различными инфекциями и вирусами. Он с большой долей вероятности установит заболевание и определит успешность лечения.

Откуда берутся антитела и для чего они нужны? Организм человека постоянно подвергается проникновению различных вирусов и инфекций. Для борьбы с ними наша иммунная система и вырабатывает специальные антитела, которые связывают инфекционные антигены и подавляют их деятельность. Серологический анализ крови сообщит о состоянии иммунной системы человека, укажет на наличие инфекционно-вирусных заболеваний в настоящем времени или тех, от которых организм уже избавился.

Серологический анализ крови, в отличие от , сдать необходимо при подозрении на какое-либо вирусное или инфекционное заболевание. Данное исследование установит точного возбудителя заболевания, в случаях, когда трудно поставить правильный диагноз. Если возбудитель выявлен верно, можно назначить максимально эффективное лечение.

В каких случаях назначают проведение этого исследования? Если нужно определить колличество антител, воздействующих на вирус или инфекцию, провоцирующих заболевание. Для этого в плазму крови вводится антиген возбудителя, после чего изучаются результаты процесса.

Возможно проведение противоположного процесса: наличие инфекции выявляют, добавляя в плазму крови антитела, что позволяет определить наличие антигенов и их принадлежность к конкретному микроорганизму.

Также с помощью проведения данного исследования определяют группу крови человека.

Анализ крови - серологические исследования необходимо проводить при подозрении на инфекционные половые заболевания, а также для постановки диагноза при подозрении венерических болезней.

Расшифровка данного анализа предоставит информацию о наличии в плазме крови антител к конкретной группе опасных микроорганизмов. У тех, кому назначено это исследование, может возникнуть вопрос, серологический анализ крови что показывает, какие именно заболевания можно определить с его помощью? Список заболеваний, диагностика которых должна осуществляться серологическим методом, на самом деле немаленький. Исследование выявит такие заболевания, как герпес, краснуха, сифилис, гепатит, токсоплазмоз, корь, брюшной тиф, лямблиоз, коклюш, и т.д.

Более того, исследование поможет выявить аутоиммунные заболевания и определит не только группу крови, но и резус-фактор. Его также проводят для подтверждения отцовства и определения природы и источника инфекции при эпидемиях. Данный тест обязательно проводят беременной женщине для обследования на предмет наличия опасных для плода заболеваний, таких как токсоплазмоз, сифилис, краснуха и т.д.

Как сдавать серологический анализ крови

Особенности проведения серологического теста

Забор крови для серологического исследования производится только через несколько недель после предполагаемого инфицирования. Если попробовать обследование провести сразу, оно даст ложные результаты. Подтверждение инфицирования можно получить только через полтора месяца после атаки.

Еще одна особенность данного метода, это вероятность ложного положительного результата в некоторых случаях. Например, при беременности можно получить ложный положительный результат на гепатит. Иногда исследование может выявить наличие ВИЧ-инфекции, в то время, как на самом деле организм такому заболеванию не подвержен. Положительный результат, полученный при первичном анализе - не истина в последней инстанции. Как правило, практически всегда для точной постановки диагноза исследование проводится повторно.

Расшифровка результатов исследования

После забора крови и проведения исследования, специалист сначала выявляет в организме человека наличие инфекционного или вирусного заболевания, а затем, исходя из колличества антител, определяет степень развития заболевания. Если проведен серологический анализ крови, расшифровка которого показывает нулевое содержание антител, значит, организм не инфицирован. Но если содержание антител немного превышено, вероятнее всего, вирусное или инфекционное заболевание имеет место быть. Но помним, что необходимо проведение повторного анализа.

Стоимость серологического анализа крови

Такое важное исследование необходимо проводить в надежном месте, ведь от этого зависит Ваше здоровье. Тест можно сделать как в обычной поликлинике, так и в специализированном платном медицинском центре. Если планируете провести тест в платной клинике, уделите особое внимание поиску подходящего центра, где работают профессионалы. Выбирайте лабораторию с длинным послужным списком и такую, которая существует уже много лет. Обращайте внимание на отзывы пациентов о конкретном медицинском центре, выбирайте такой, на который соберете максимально положительные отзывы. При этом, не стоит доверять откликам, найденным в Интернете, лучше поспрашивайте знакомых о профессиональных лабораториях. Лучше доверять информации, полученной от конкретного человека, с которым Вы знакомы лично.

Цены на серологический анализ крови могут сильно варьироваться. На стоимость влияет предполагаемое заболевание, диагностирование которого необходимо и место проведения. В среднем, цены на исследование начинаются от 300 рублей, а верхняя граница может превышать и 3000 рублей.