Температура определения групп крови. Определение группы крови и резус-фактора определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

В современной медицине группа крови характеризует набор расположенных на поверхности эритроцитов антигенов, которые определяют их специфичность. Существует огромное количество таких антигенов (обычно применяется таблица групп крови с разнообразными антигенами), но повсеместно производится определение группы крови с использованием классификации по резус-фактору и системе АВ0.

Определение группы является обязательной процедурой при подготовке к любой операции. Такой анализ также необходим при поступлении на службу в некоторые контингенты, среди которых военные, работники внутренних органов и силовых структур. Данное мероприятие проводится из-за повышенного риска возникновения состояния, угрожающего жизни человека, в целях сокращения времени, требуемого для оказания помощи в виде переливания крови.

Состав крови различных групп крови

Суть системы АВ0 состоит в наличии структур антигенов на эритроцитах. В плазме нет соответствующих им типовых антител (гамма-глобулинов). Поэтому для исследования крови можно использовать реакцию «антиген + антитело».

Эритроциты склеиваются в момент встречи антигена и антитела. Подобная реакция носит название гемагглютинации. Реакция отображается в виде небольших хлопьев при проведении анализа. Исследование основано на получении изображения агглютинации с сыворотками.

Связываются антигены эритроцитов «А» с антителами «ά», а также «В» с «β» соответственно.

Выделяются следующие группы крови по составу:

• I (0) – ά, β - поверхность эритроцитов совсем не содержит антигенов;
• II (А) – β - на поверхности имеется антиген А и антитело β;
• III (В) – ά - поверхность содержит В с антителом типа ά;
• IV (АВ) – 00 - поверхность содержит оба антигена, однако не имеет антител.

Антигены есть у зародыша уже в состоянии эмбриона, а агглютинины (антитела) появляются на первом месяце жизни.

Методы определения

Стандартный метод

Существует множество техник, однако в лаборатории обычно используют определение с помощью стандартных сывороток.

Метод по стандартным сывороткам используется для определения типов антигенов АВ0. Состав стандартной изогемагглютинирующей сыворотки содержит набор антител к молекулам эритроцитов. В случае наличия антигена, который подвержен действию антител, формируется комплекс антиген-антитело, что запускает каскад реакций иммунитета.

Результатом данной реакции является агглютинация эритроцитов, на основании характера происходящей агглютинации можно определить принадлежность образца к какой-либо группе.

Для приготовления стандартной сыворотки используется донорская кровь и определенная система - посредством выделения плазмы, включающей антитела, и последующего ее разведения. Разведение выполняется с использованием изотонического раствора натрий хлорида.

Разведение производится так:

Непосредственно исследование проводится таким образом:

1. На специальный планшет помещают по капле каждой сыворотки (общим объемом примерно 0.1 миллилитр) на участок, где имеется соответствующая пометка (применяются 2 образца, из них один – контрольный, второй предназначен для исследования).
2. Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают исследуемый образец в объеме 0.01 миллилитра, после чего его по отдельности смешивают с каждым диагностикумом.

Правила расшифровки результатов

Спустя пять минут можно производить оценку результатов исследования. В больших каплях сыворотки происходит просветление, в одних наблюдается реакция агглютинации (образуются мелкие хлопья), в других – нет.

Видео: Определение группы крови и резус-фактора

Здесь возможны варианты:

• Если реакции агглютинации нет в обеих пробах с сыворотками II и III (+ контрольные 1 и IV) - определение первой группы;
• Если свертывание наблюдается во всех пробах, кроме II - определение второй;
• При отсутствии реакции агглютинации только в пробе с III группы - определение III;
• Если свертываемость наблюдается во всех пробах, в том числе в IV-контрольной - определение IV.

Когда сыворотки располагаются в правильном порядке и на тарелке стоят подписи, ориентироваться легко: группа соответствует местам с отсутствующей агглютинацией.

В некоторых случаях склеивание неясно различимо. Тогда анализ необходимо переделать, мелкую агглютинацию наблюдают под микроскопом.

Метод перекрестной реакции

Суть этой техники состоит в определении агглютиногенов при помощи стандартных сывороток или цоликлонов с параллельным определением агглютининов с помощью эталонных эритроцитов.

Техника анализа перекрестным методом практически не имеет отличий от исследования с помощью сывороток, но присутствуют некоторые дополнения.

На планшетку под сыворотками необходимо добавить по капле стандартных эритроцитов. Затем из пробирки с кровью пациента, прошедшую через центрифугу, пипеткой извлекают плазму, которую помещают к стандартным эритроцитам, находящиеся на дне – добавляют в стандартную сыворотку.

Так же, как и согласно технике стандартной методики, результаты исследования оценивают спустя несколько минут после начала реакции. В случае наличия реакции агглютинации можно говорить о наличии агглютининов АВ0, в случае реакции плазмы можно судить об агглютиногенах.

Результаты исследования крови с применением стандартных эритроцитов и сывороток:

Агглютинация;

– агглютинация отсутствует;

— реакцию не проводят.

Перекрестный метод получил распространение за счет того, что он предотвращает диагностические ошибки, возникающие при применении стандартных методик.

Определение группы крови цоликлонами

Цоликлоны - синтетические заменители сывороток, которые содержат в своем составе искусственные заменители агглютининов типов ά и β. Они называются эритротестами «Цоликлон анти-А» (имеют розовый цвет), а также «анти-В» (имеют синий цвет). Ожидаемая агглютинация наблюдается между агглютининами цоликлонов и эритроцитами крови.

Данная методика не требует двух серий, она является более надежной и точной. Проведение исследования и оценка его результатов происходят так же, как и в стандартном методе.

IV группа (АВ) обязательно подтверждается агглютинацией с цоликлоном «анти-АВ», а также отсутствием склеивания эритроцитов в изотоническом растворе натрия хлорида.

Экспресс-методика с помощью набора «Эритротест-группокарт»

Хотя общепринятые способы определения принадлежности крови к конкретной группе распространены повсеместно, в современной медицине происходит внедрение экспресс-методов, самым распространенным из которых является “Эритротест”.

При определении группы с применением методики “Эритротест группокарт” необходим комплект инструментов, включающий следующие приборы:

• Планшетка, имеющая с пять лунок, для произведения определения группы по ее резус-принадлежности и системе АВ0;
• Скарификатор, предназначенный для получения образца, необходимого для исследования;
• Стеклянные палочки для перемешивания образцов;
• Чистая пипетка для набора растворов.

Все перечисленные инструменты необходимо для безошибочного проведения диагностики.

Набор для анализа крови “Эритротест-группокарт” позволяет проводить исследование резус-фактора и определение группы крови в любых условиях, она особенно эффективна при отсутствии возможности использования общепринятых методов.

В лунках на планшетке расположены цоликлоны к антигенам (это цоликлоны анти-А, -В, -АВ) и к основному антигену, который обуславливает наследование резус-фактора (это цоликлон анти-D). Пятая лунка содержит контрольный реагент, который позволяет предотвратить возможные ошибки и грамотно определить принадлежность к группе крови.

Видео: Определения групп крови с помощью цоликлонов

Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется с помощью реакции агглютинации. В настоящее время используют три способа определения групп крови по системе АВО:

по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стандартным эритроцитам (перекрестный способ),

с помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

При этом существует следующая общепринятая тактика при определении группы крови.

При плановом исследовании врач стационара определяет группу крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам или с помощью цоликлонов, после чего посылает кровь в серологическую лабораторию для проверки группы перекрестным методом.

Группа крови считается определенной только тогда, когда лаборатория подтвердит данные, полученные врачом стационара. Если результаты исследований расходятся между собой, оба исследования нужно При необходимости определения группы крови в экстренном порядке (при кровотечении необходимо срочное переливание крови), врач стационара определяет группу сам (в лаборатории перепроверка производится, но постфактум). В таких случаях также используются реакции с изогемагглютинирующими сыворотками (или цоликлонами), но при возможности целесообразно применение перекрестного метода.

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам.

Этот способ в настоящее время наиболее распространен в клинической и лабораторной практике.

Суть метода сводится к обнаружению в испытуемой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток. Для этих целей используется реакция агглютинации. Постановку реакции проводят в помещении с хорошим освещением при температуре 15-25°С.

Необходимое оснащение

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных серий. Сыворотки для определения групп крови изготавливают в специальных серологических лабораториях из донорской крови. Сыворотки хранят при температуре 4-8 "С (в холодильнике).

Срок годности сыворотки указан на этикетке. Титр сыворотки (также указывается на этикетке) должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1: 16/32). Под титром сыворотки понимается то максимальное ее разведение, при котором может наступать реакция агглютинации. Сыворотка должна быть прозрачной, без признаков гниения. Для удобства стандартные гемагглютинирующие сыворотки различных групп подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая.

Белые фарфоровые или эмалированные тарелки или любые другие пластинки со смачиваемой поверхностью, маркированные 0(1), А(Ы), ВЦП), AB(IV).

Изотонический раствор хлорида натрия.

Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предметные стекла).

Техника проведения реакции

Под соответствующими обозначениями группы крови на тарелку (пластинку) наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворотки I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля около 1 см в диаметре).

Во избежание ошибок наносят две серии сывороток каждой из групп, так как одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: О (I), A (II), В (III).

Кровь для исследования берут из пальца или из вены. Шесть капель исследуемой крови величиной приблизительно с булавочную головку 0,01 мл (маленькая капля) последовательно переносят сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек, каждую рядом с каплей стандартной сыворотки (количество испытуемой крови должно быть приблизительно в 10 раз меньше количества стандартной сыворотки, с которой она смешивается), потом их осторожно с помощью стеклянных палочек с закругленными краями перемешивают.

Возможна более простая методика: на тарелку наносят одну большую каплю крови, из которой ее забирают уголком предметного стекла и переносят в каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая с последней. При этом всякий раз кровь берут новым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не сливались.

После смешивания тарелку периодически покачивают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует обязательно вести до 5 минут ввиду возможности более поздней агглютинации, например с эритроцитами группы А2(Н).

В те капли, где произошла агглютинация, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результат реакции.

Трактовка результатов

Реакция агглютинации может быть положительной или отрицательной.

При положительной реакции обычно в течение первых 10-30 секунд в смеси появляются видимые невооруженным взглядом мелкие красные зернышки (агглютинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мелкие зернышки постепенно сливаются в более крупные зерна, а иногда в хлопья неправильной формы.

При этом сыворотка частично или полностью обесцвечивается. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет и в ней не обнаруживается никаких зернышек (агглютинатов).

Принадлежность исследуемой крови к соответствующей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сыворотками.

При этом следует отметить, что, если сыворотки всех трех групп дали положительную реакцию, это указывает на то, что испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В и принадлежит к группе AB(IV).

Однако в таких случаях для исключения неспецифической реакции агглютинации необходимо провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной изогемагглютинирующей сывороткой группы AB(IV), не содержащей агглютининов.

Лишь отсутствие агглютинации в этой капле при наличии агглютинации в каплях, содержащих стандартные сыворотки групп 0(1), А(И) и В(Ш), позволяет считать реакцию специфической и отнести исследуемую кровь к группе АВ0 (IV).

Следует отметить, что при наличии в исследуемой крови слабого подтипа антигена А2 реакция агглютинации с гемагглютинирующими сыворотками групп 0(1) и В(Ш) начинается позже (на 3-4 минуте).

Для точного определения подтипа антигена А необходимо проведение дополнительной реакции с так называемым анти-А, реактивом, изготовляемым из семян растения Dolichos bitforis, содержащим только анти-А, антитела (проводится в серологической лаборатории).

Группы крови системы АВ0

Группы крови системы АВ0 были открыты в 1900 году К.Ландштейнером, который смешивая эритроциты одних лиц с сывороткой крови других лиц, обнаружил, что при одних сочетаниях кровь свертывается, образуя хлопья (реакция агглютинации), а при других нет. На основании этих исследований Ландштейнер разделил кровь всех людей на три группы: А, В и С. В 1907 году была обнаружена еще одна группа крови.

Было установлено, что реакция агглютинации происходит при склеивании антигенов одной группы крови (их назвали агглютиногенами), которые находятся в красных кровяных тельцах - эритроцитах с антителами другой группы (их назвали агглютининам), находящимися в плазме - жидкой части крови. Разделение крови по системе АВ0 на четыре группы основано на том, что кровь может содержать или не содержать антигены (агглютиногены) А и В, а также антитела (агглютинины) α (альфа или анти-А) и β (бета или анти-Б).

Первая группа крови - 0 (I)

I группа - не содержит агглютиногенов (антигенов), но содержит агглютинины (антитела) α и β. Она обозначается 0 (I). Так как эта группа не содержит инородных частиц (антигенов), то ее можно переливать всем людям. Человек с такой группой крови является универсальным донором.

Вторая группа крови А β (II)

II группа содержит агглютиноген (антиген) А и агглютинин β (антитела к агглютиногену В). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген В - это I и II группы.

Третья группа крови Вα (III)

III группа содержит агглютиноген (антиген) В и агглютинин α (антитела к агглютиногену А). Поэтому ее можно переливать только тем группам, которые не содержат антиген А - это I и III группы.

Четвертая группа крови АВ0 (IV)

IV группа крови содержит агглютиногены (антигены) А и В, но содержит агглютининов (антител). Поэтому ее можно переливать только тем, у кого такая же, четвертая группа крови. Но, так как в крови таких людей нет антител, способных склеиться с вводимыми извне антителами, то им можно переливать кровь любой группы. Люди с четвертой группой крови являются универсальными реципиентами.

Группы крови по системе АВО

Методика определения групп крови

Групповая принадлежность крови по системе АВО определяется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время существует три способа опреде­ления групп крови по системе АВО:

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам;

С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Определение групп крови по стандартным изогемагглютинирующим сывороткам

Суть метода сводится к обнаружению в испыту­емой крови групповых антигенов А и В с помощью стандартных сывороток. Для этих целей использу­ется реакция агглютинации. Пробу нужно делать в помещении с хорошим освещением при темпера­туре 15-25° С.

Для проведения пробы необходимы: - Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп О (I), А (II), В (III) и АВ (IV) двух различных се­рий. Сыворотки для определения групп крови изготав­ливают из донорской крови в специальных лаборато­риях. Хранятся сыворотки в холодильнике при темпе­ратуре 4 - 8° С. Срок годности сыворотки указывают на этикетке. На этикетке также указывается титр (то мак­симальное разведение сыворотки, при котором может наступить реакция агглютинации), который должен быть не ниже 1: 32 (для сыворотки В (III) - не ниже 1:16 /32). Сыворотка должна быть прозрачной, без при­знаков гниения. Стандартные сыворотки для удобства подкрашивают в определенный цвет: О (I) - бесцветная (серая), А (II) - синяя, В (III) - красная, АВ (IV) - ярко-желтая. Эти цвета сопутствуют всем этикеткам на пре­паратах крови, имеющих групповую принадлежность (кровь, эритроцитная масса, плазма и др.).

Белые фарфоровые или эмалированные тарел­ки или другие пластинки со смачиваемой поверх­ностью, маркированные, согласно группам крови.

Изотонический раствор хлорида натрия.

Иглы, пипетки, стеклянные палочки (предмет­ные стекла).

Техника проведения реакции.

1. Под соответствующими обозначениями груп­пы крови на тарелку (пластинку) наносят сыворот­ку I, II, III групп в объеме 0,1 мл (одна большая капля диаметром около 1 см). Чтобы избежать оши­бок, наносят две серии сывороток, поскольку одна из серий может иметь низкую активность и не дать четкой агглютинации. Таким образом, получается 6 капель, образующих два ряда по три капли в сле­дующем порядке слева направо: 0 (I), А (II), В (III).

2. Кровь для исследований берут из пальца или из вены. Сухой стеклянной палочкой на пластину в 6 точек последовательно переносят 6 капель иссле­дуемой крови величиной примерно с булавочную го­ловку 0,01 мл (маленькая капля), каждую рядом с каплей стандартной сыворотки. Причем количество сыворотки должно в 10 раз превышать количество исследуемой крови. Затем их осторожно переме­шивают между собой стеклянными палочками с за­кругленными краями.

Возможна и более простая методика: на тарел­ку наносится одна большая капля крови, потом ее забирают оттуда уголком предметного стекла и переносят каждую каплю сыворотки, аккуратно перемешивая ее с последней. При этом кровь каж­дый раз берут чистым уголком стекла, следя за тем, чтобы капли не смешивались.

3. Смешав капли, тарелку периодически покачи­вают. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд. Но наблюдение следует вести не ме­нее 5 минут, так как возможна более поздняя агглю­тинация, например с эритроцитами группы А 2 (II).

4. В те капли, где произошла реакция, добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия, после чего оценивают результаты реакции.

Реакция агглютинации может быть положитель­ной или отрицательной

При положительной реакции в течение первых 10-30 секунд наблюдают в смеси видимые невоору­женным глазом мелкие красные зернышки (агглю-тинаты), состоящие из склеенных эритроцитов. Мел­кие зернышки постепенно сливаются в более круп­ные зерна или даже в хлопья неправильной формы. При отрицательной реакции капля остается равно­мерно окрашенной в красный цвет.

Результаты реакций двух серий в каплях с сыво­роткой одной и той же группы должны совпадать.

Принадлежность исследуемой крови к соответству­ющей группе определяют по наличию или отсутствию агглютинации при реакции с соответствующими сы­воротками.

Если все сыворотки дали положительную реакцию, значит, испытуемая кровь содержит оба агглютиногена - А и В. Но в таких случаях, чтобы исключить неспецифическую реакцию агглютинации, следует провести дополнительное контрольное исследование испытуемой крови со стандартной сывороткой группы АВ (IV).

Определение групп крови моноклональными антителами

Для определения групп крови этим способом используют моноклинальные антитела, которые по­лучают с помощью гибридомной, биотехнологии.

Гибридома - это клеточный гибрид, образованный путем слияния клетки костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, который синтезирует спе­цифические моноклональные антитела. Гибридома обладает способностью к неограниченному росту, ха­рактерна для опухолевой клетки и присущей лим­фоциту способностью синтезировать антитела.

Разработаны стандартные реагенты-моноклональные антитела (МКА): цоликлоны анти-А и анти-В, при­меняемые для определения агглютиногенов эритроци­тов. Цоликлоны представляют собой лиофилизированный порошок красного (анти-А) и синего (анти-В) цвета, который разводят изотоническим раствором хлорида натрия непосредственно перед пробой.

Техника проведения.

Цоликлоны анти-А и анти-В наносят на белый планшет по одной большой капле (0,1 мл) под соот­ветствующими надписями: анти-А или анти-В. Ря­дом с каплями антител следует нанести по одной маленькой капле исследуемой крови. После переме­шивания компонентов наблюдают за реакцией агг­лютинации в течение 2-3 минут. Оценка результа­тов очень проста.

Определение групповой принадлежности крови может сопровождаться ошибками, которые ведут к неправильной трактовке результатов. Можно выде­лить три основные группы ошибок: ошибки, свя­занные с низким качеством реагентов; техничес­кие ошибки; ошибки, связанные с особенностями Схема оценки результатов определения групп крови спомощью моноклональных антител(цоликлоны анти-А и анти-В)исследуемой крови. Первых двух можно избежать, строго соблюдая описанные выше требования к сыво­ротке, условиям проведения реакции и др. Третья группа связана с явлением неспецифической панагглютинации (феномен Томсена), сущность которого состоит в том, что сыворотка при комнатной темпера­туре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже со своими собственными (аутоагглютинация), а эрит­роциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, даже с сывороткой группы АВ. Подоб­ное явление описано при ряде заболеваний: болезнях крови, спленомегалии, циррозе печени, инфекционных заболеваниях и др. Описана также панагглютинация и аутоагглютинация у здоровых людей.

Явление панагглютинации и аутоагглютинации наблюдается только при комнатной температуре. Если определение групповой принадлежности про­водить при температуре 37° С, они исчезают.

Нужно строго помнить, что во всех случаях не­четкого или сомнительногскрезультата следует про­вести повторное определение групп крови при по­мощи стандартных сывороток других серий, а так­же перекрестным способом.

Группы крови - это нормальные передающиеся по наследству различные иммунологические признаки крови. На основании этих признаков всех людей подразделяют на четыре группы вне зависимости от расовой принадлежности, возраста и пола. Группа крови у человека остается постоянной в течение всей его жизни. Люди одной группы крови отличаются от людей других групп крови наличием или отсутствием у них агглютиногенов (А и В), содержащихся в эритроцитах, и агглютининов α и β, содержащихся в сыворотке.

Группы крови системы AB0: 0(I) группа крови содержит агглютинины α и β, агглютиногены в ней отсутствуют; А (II) группа крови - агглютинин α и агглютиноген А; В(III) группа крови-агглютинина и агглютиноген В; AB(IV) группа крови - содержит агглютиногены А и В, агглютинины отсутствуют.

Реципиент - человек, которому переливают кровь, донор - человек, дающий свою кровь для переливания. Идеально совместимой для реципиента является кровь такой же группы. Кровь абсолютно несовместима, если у реципиента имеются агглютинины к эритроцитам донора, так как в этих случаях происходит соединение агглютиногена А одной крови с агглютинином а другой или агглютиногена В с агглютинином β. Развивается так называемая , т. е. склеивание эритроцитов в маленькие и большие комочки. Переливание несовместимой крови приводит к тяжелым последствиям и может быть причиной смерти. Реципиенту 0(I) группы нельзя переливать кровь никакой другой группы, кроме той же. У реципиента AB(IV) группы никаких агглютининов нет, поэтому ему можно переливать кровь всех групп. Реципиент AB(IV) группы - универсальный реципиент. Кровь 0(I) группы можно перелить людям с любой группы крови. Поэтому людей с 0(I) группой называют универсальными донорами.

Помимо агглютиногенов А и В, в эритроцитах встречаются иногда и другие агглютиногены (например, и др.). В тех случаях, когда кровь несовместима по резус-фактору (см.), производить переливание также нельзя во избежание серьезных осложнений, связанных с разрушением эритроцитов (гемолизом).

Перед каждым переливанием крови, проводимым по назначению и под наблюдением врача, необходимо обязательно проводить определение группы крови и выявлять ее совместимость.

Рис. 1-4. Определение групп крови со стандартными сыворотками (А, В, 0).
Рис. 1. Испытуемая кровь группы 0(I).
Рис. 2. Испытуемая кровь группы А (II).
Рис. 3. Испытуемая кровь группы В (III).
Рис. 4. Испытуемая кровь группы АВ (IV).

Методика определения групп крови . Для определения группы крови приготовляют чистую тарелку, карандаш для стекла, стандартные сыворотки 0(I), А(II) и В(III) группы крови, флаконы с изотоническим раствором хлорида натрия, спиртом и йодом, гигроскопическую вату, предметное стекло или стеклянные палочки и три пипетки, которые должны быть сухими (вода разрушает ).

Тарелку разделяют карандашом на три сектора, которые обозначают 0(I), А(I), В(III). На соответствующий сектор различными пипетками наносят по одной крупной капле стандартной сыворотки 0(I), А(II), В(III) группы крови. После того как из пипетки выпущена капля сыворотки, ее немедленно опускают в тот флакон, из которого она была взята. Палец перед взятием крови обтирают спиртом. После укола в мякоть пальца иглой выжимают каплю крови. Стеклянной палочкой или углом чистого предметного стекла переносят три капли крови (каждая величиной с булавочную головку) на тарелку рядом с сыворотками 0(I), А(II) и В(III) группы крови. Отметив на часах время, каждый раз новыми стеклянными палочками перемешивают кровь поочередно с сыворотками группы крови 0(I), А(II) и В(III), пока смесь не станет равномерно розового цвета. Определение группы крови производят в течение 5 мин. (следить по часам). По истечении этого времени к каждой капле смеси добавляют по одной капле изотонического раствора хлорида натрия. После этого тарелку с кровью слегка покачивают, наклоняя в разные стороны так, чтобы смеси хорошо перемешались с изотоническим раствором хлорида натрия, но не растекались по стеклу. При положительной реакции в течение первых минут от начала перемешивания еще до прибавления изотонического раствора в смеси появляются мельчайшие красные зернышки, состоящие из склеившихся эритроцитов. Мелкие зернышки сливаются в более крупные, а иногда в хлопья разной величины (явление агглютинации). При отрицательной реакции смесь остается равномерно окрашенной в розовый цвет. При проведении пробы с тремя перечисленными выше сыворотками для каждой группы крови может выпасть определенная комбинация положительных и отрицательных реакций (рис. 1-4). Если все три сыворотки дали отрицательную реакцию, т. е. все смеси остались равномерно окрашенными в розовый цвет, испытуемая кровь принадлежит 0(I) группе. Если отрицательную реакцию дала только сыворотка А(I) группы крови, а сыворотки 0(I) и В(III) группы крови дали положительную реакцию, т. е. в них появились зерна, то испытуемая кровь принадлежит к А(II) группе. Если сыворотка В(III) группы крови дала отрицательную реакцию, а сыворотки 0(I) и А(II) группы крови - положительную, то испытуемая кровь относится к В(III) группе. Если все три сыворотки дали положительные реакции, т. е. всюду появилась зернистость, испытуемая кровь относится к AB(IV) группе. Всякие иные комбинации указывают на ошибку в определении. Причины ошибок при определении групп крови и меры их предотвращения. 1. Избыток крови, если взята слишком большая капля. Капля крови должна быть в 10 раз меньше, чем капля сыворотки. 2. Если сыворотки слабы или эритроциты испытуемого плохо склеиваются, можно просмотреть агглютинацию (см.), так как реакция начинается поздно или бывает слабо выражена. Необходимо брать надежные сыворотки, активность которых проверена и срок годности не истек. 3. При низкой температуре окружающего воздуха может наступить неспецифическая холодовая агглютинация - панагглютинация. Прибавление изотонического раствора хлорида натрия с последующим покачиванием тарелки обычно уничтожает холодовую агглютинацию. Чтобы избежать этого, температура окружающего воздуха должна быть не ниже 12 и не выше 25°. 4. При долгом наблюдении смесь начинает подсыхать с периферии, где иногда появляется зернистость. При отсутствии зернистости в жидкой части смеси можно говорить об отрицательной реакции агглютинации.

Определив группу крови, врач должен тотчас же сделать запись на лицевом листе . После окончания работы тарелку, пипетки и предметные стекла нужно тщательно вымыть под краном теплой водой, вытереть насухо и поставить в шкаф. в ампулах или флаконах хранятся в сухом и теплом помещении в запертом на ключ шкафу при t° не выше 20°.

Определение группы крови по стандартным эритроцитам (так называемая двойная реакция) применяют лишь в лабораториях и на станциях . В повседневной работе пользуются реакцией агглютинации со стандартными сыворотками по описанной выше методике.

Веками ученые пытались узнать о человеческом организме как можно больше и научиться исцелять больных от любой болезни. Одним из важных параметров является определение группы крови цоликлонами. Медицина выделяет у людей всего четыре группы крови не зависимо от половой или расовой принадлежности. Иммунологические признаки, которые и составляют основное различие по группе эритроцитарных антигенов, передаются по наследству.

Что такое цоликлон

Определение группы крови с помощью различных лабораторных реагентов стандартный метод исследований. Информация группе крови крайне важна, особенно в тех случаях, когда человеку нужна экстренная помощь. Перед хирургическим вмешательством обязательно определяется тип индивидуальных антигенных характеристик человека. Та же процедура является обязательно для военнослужащих (информация указывается на форме), для женщин перед родами и т.д.

Цоликлонами сравнительно новый метод исследования. Этот анализ может проводиться на любом этапе стационарного лечения пациентов.

Для осуществления лабораторного исследования не требуется много времени, достаточно наличие всех необходимых химических веществ (цоликлонов) и простого оборудования.

Цоликлоны по сути являются одним из видов иммуноглобулинов (тип М). Это моноклональные антитела, которые были образованы с помощью генной инженерии. Цоликлоны получены в результате воздействия сыворотки на стерильных лабораторных мышей. Образовывается скопление жидкости в брюшной полости грызуна, которая содержит эти антитела.

Подготовка к процедуре

Определение групп крови с помощью цоликлонов требует предварительной подготовки и действий согласно установленному алгоритму. Обстановка в помещении, в котором проводится анализ оговорена отдельно. Температура воздуха должна быть не ниже 15 и не выше 25 градусов, иначе результат исследования не может считаться достоверным. В помещении не должно быть пыли, животных, насекомых и других факторов, которые могут физически повлиять на процесс проведения исследования. Также проведение лабораторного анализа требует хорошей освещенности помещения.

При использовании цоликлонов важно держать флаконы плотно зарытыми и не допускать пересыхания реагентов, иначе способность антител к активным действиям заметно снижается. Перед процедурой подготавливается весь необходимый инвентарь. Для проведения анализа потребуется пробирка для биологического образца, планшет для нанесения реагентов, стерильные пипетки и палочки для взаимодействия с биологическими образцами.

Если лаборант проводит не только лабораторное исследование, но и забор крови, то необходимо подготовить одноразовые шприцы или вакуумные пробирки, жгут, медицинский спирт, ватные шарики и стерильные салфетки. Также под рукой должны быть инструменты для маркировки биообразов пациентов.

Проведения анализа

В современной лабораторной диагностике используется три вида стандартных цоликлонов для определения группы крови и резус фактора. Реагент типа «Анти-А» окрашен в красный цвет, также окрашен и флакон, колпачок или этикетка флакона». Тип «Анти-В» окрашивается синим, а «Анти АВ» не помечается цветным маркером. Производители реагентов выпускают упаковки с цоликлонами 5 или 10 мл. Не допускается использование испорченных или некачественных реагентов.

При наличии видимых дефектов упаковки или появлении хлопьев в жидкости, цоликлон не используют.

• Для определения на специально подготовленную пластину, которая оформлена как таблица, наносят цоликлоны различных типов (А, В и АВ). Каждый из них должен быть подписан. Реагент наносится на специально отмеченную область. Каждый тип цоликлона должен наноситься отдельной стерильной пипеткой.
• Рядом с реагентами помещается по 1 капле крови пациента.
• Стерильной палочкой реагенты смешивают с биологическим образцом.
• Уже спустя несколько секунд можно заметить изменения и происходящую реакцию агглютинации. По правилам наблюдение следует вести в течение 3 минут. После этого можно сделать вывод о результатах исследования.

Как понять результат

• Отсутствие какой-либо реакции склеивания во всех образцах означает, что в клетках эритроцитов пациента нет агглютиногена исследуемого типа. Образец крови причисляется к I группе (тип 0).
• Если эритроцитарные клетки пациента вступили в реакцию с реагентами типа «Анти-а» и «Анти-АВ», то у пациента II группа крови (тип А).
• Заметная агглютинация образца исследуемой крови с цоликлонами тип «Анти-АВ» и «Анти-В» означает, что пациент обладает III группой крови (тип В).
• Если кровь пациента вступила в реакцию со всеми химичсекими реагентами, то исследуемый образец принадлежит к IV группе (тип АВ). При определении группы крови с помощью цоликлонов дополнительной проверки не требуется, так как реагенты не содержат добавок, которые могут спровоцировать спонтанную реакцию.

Определение группы крови и резус фактора проводится в лабораторных учреждениях в медицинских учреждениях. Это достаточно простое исследование, которое дает очень полезную и жизненно важную информацию о человеке.